缺氧诱导因子1-α在肝癌组织中的表达及其诱导索拉非尼耐药的作用和机制研究

发布时间：2018-03-03 17:51

本文选题：原发性肝细胞癌　切入点：索拉非尼　出处：《中国人民解放军医学院》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：研究目的:本研究探讨原发性肝细胞癌组织中缺氧诱导因子1α (HIF1α)蛋白的表达情况,评估晚期肝癌患者口服索拉非尼的疗效,分析HIF1α蛋白表达与索拉非尼(sorafenib)耐药之间的关系。并在体外实验中进一步探讨HIF1α诱导索拉非尼耐药的作用和可能的分子机制。希望能够为解决索拉非尼耐药提供思路和帮助。材料与方法:回顾性收集自2006年1月至2014年1月在我院接受过肝癌手术或肝癌穿刺活检术并且接受了正规索拉非尼治疗的患者的临床病理资料,查阅病例资料并对病人进行随访。采用免疫组化方法,对肝癌组织切片进行HIF1α蛋白染色。根据染色结果,将所有病人分为HIF1α蛋白表达阴性组和HIF1α蛋白表达阳性组。收集这两组病人的临床病理特征、口服索拉非尼后的总体生存时间(OS)、口服索拉非尼后的无疾病进展生存时间(PFS),分析索拉非尼的疗效,并分析HIF1α蛋白表达对索拉非尼疗效的影响。培养肝癌细胞,建立缺氧模型,构建HIF1α过表达和下调慢病毒载体,分别将HIF1α过表达和下调慢病毒转染肝癌细胞,并进行Western Blot(WB)、CCK8细胞增殖实验、细胞凋亡实验、细胞周期等实验,进一步分析HIF1α对索拉非尼耐药的作用和机制。结果:(1)共有67人纳入本研究中,其中男性59名,女性8名,中位随访时间327.5天。HIF1α蛋白表达阳性患者共30例(44.8%),HIF1α蛋白表达阴性患者共37例(55.2%)。HIF1α蛋白阳性表达主要位于细胞浆,少部分也可以出现在细胞核,或者细胞浆和细胞核。(2) HIF1α蛋白阳性表达与AFP高表达水平、肿瘤分化程度低、肿瘤直径大呈正相关。(3) 口服索拉非尼后,部分缓解(PR)有7人(10.4%),疾病稳定(SD)有44人(65.7%),疾病进展(PD)有10人(14.9%),未获取到疗效评价信息的6人(9%)。PD组患者HIF1α蛋白阳性表达率为80%,显著高于SD组(36.4%),PR组(14.3%) (P=0.0126)。(4)生存分析结果发现HIF1α蛋白阳性表达、患者高龄、有肿瘤家族史、KPS评分低、肿瘤有肝内转移、肿瘤分化程度低、肿瘤直径大、口服索拉非尼前未行TACE治疗是影响总体生存时间的不良预后因素;HIF1α蛋白阳性表达、有肿瘤家族史、KPS评分低、肿瘤有肝内转移、肿瘤分化程度低、口服索拉非尼前未行TACE治疗是影响疾病无进展生存时间的不良预后因素。(5)常规培养肝癌细胞,细胞增殖实验结果显示,缺氧条件与常氧条件下对比,索拉非尼抑制肝癌细胞增殖的作用明显减弱(P0.05)。凋亡实验提示,缺氧条件与常氧条件对比,索拉非尼促进肿瘤细胞凋亡的作用明显减弱(P0.01)。细胞周期实验未发现缺氧和常氧条件下分别加入索拉非尼后,肝癌细胞周期各阶段的百分比有明显差异。(6)分别利用HIF1α过表达慢病毒和HIF1α下调慢病毒转染肝癌细胞。细胞增殖实验结果提示HIF1α过表达后,随着索拉非尼浓度的增加,细胞增殖率较常氧+空载转染组明显增加(P0.01);相反,HIF1α下调后,随着索拉非尼浓度的增加,细胞增殖率与常氧+空载转染组相仿,但是较缺氧+空载转染组明显减少(P0.01)。凋亡实验结果提示,HIF1α过表达后,加入索拉非尼,细胞凋亡率较常氧+空载转染+索拉非尼组明显减少(P0.01);相反,HIF1α下调后,加入索拉非尼,细胞凋亡率与常氧+空载转染+索拉非尼组相仿,并显著高于缺氧+空载转染+索拉非尼组(P0.01)。(7)将HIF1α过表达慢病毒转染肝癌细胞后,利用Western Blot的方法检测索拉非尼各靶点磷酸化水平的变化(pVEGFR2、pPDGFRβ、pRAF、pMEK1、pERK),我们发现其靶点蛋白表达水平较对照组(常氧状态下加入索拉非尼)明显升高。结论:1.HIF1α蛋白在肝癌组织中可以出现阳性表达,并且主要位于细胞浆。肝癌组织中HIF1α蛋白的表达是预测索拉非尼疗效和肝癌预后的独立危险因素。2.HIF1α蛋白阳性表达、有肿瘤家族史、KPS评分低、肿瘤有肝内转移、肿瘤分化程度低、口服索拉非尼前未行TACE治疗是影响总体生存时间和无疾病进展生存时间的不良预后因素。3.缺氧通过降低索拉非尼抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡的作用,可以诱导索拉非尼耐药。4.HIF1α同样可以通过上述两方面作用来诱导索拉非尼耐药。5.HIF1α诱导索拉非尼耐药的分子机制可能是其上调了索拉非尼作用靶点的磷酸化水平。
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【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

【参考文献】