microRNA-223在H.pylori相关胃癌中过表达并诱导胃癌细胞生长和迁移的研究

发布时间：2018-03-04 04:36

  本文选题：microRNA-223　切入点：胃癌　出处：《吉林大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：胃癌致死率在全世界居癌症相关死亡性疾病的第二位，是威胁人类健康最常见的恶性肿瘤之一。胃癌在我国其发病率居各类肿瘤的首位，因其早期无症状而至的低检出率导致其根除率不高、预后较差。每年死于胃癌人数接近全部恶性肿瘤死亡人数的1/4，严重威胁我国人民身体健康的疾病。胃癌的发病机制不清，与遗传、环境及生活习惯等多重因素有关。研究证实，幽门螺旋杆菌（helicobacter pylori, H.pylori）感染是诱发胃癌发生的最重要环境因素之一。H.pylori的脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）、Cytotoxin-associatedgeneA（CagA）等毒力因子可以使胃粘膜产生持续的慢性炎症、形成糜烂或溃疡、增强胃癌细胞的增殖、促进胃癌进展。 microRNA（miRNAs或miRs）即微小RNA，是一种内源性的、长度为18-24个核苷酸非编码的单链小RNA分子，可以调控靶基因mRNA表达、进而可以促进细胞的增殖、凋亡、分化等，microRNA与多种疾病相关，尤其是与肿瘤的发生、发展、转移密切相关。近年来，大量研究显示microRNAs在胃癌发生发展中的发挥重要作用，胃肠道癌症的microRNA表达谱与其它类型癌症及正常胃肠道组织的microRNA表达谱存在明显差异，例如，microRNA-223是第一个在生物信息学得到确认的microRNA，在Barrett食管、结肠癌及胃癌等消化道疾病或肿瘤中的表达异常增高。在胃肠道恶性肿瘤诊断方面具有重要价值。 鉴于H.pylori在胃癌发生中的重要作用，我们需要继续探索H.pylori对胃癌密切相关的microRNA表达及其对胃癌细胞生长、迁移能力的调控，以利于揭示胃癌的发生机制。本研究拟通过对比研究microRNA-223在胃癌中表达与H.pylori感染的相关性、胃癌中microRNA-223表达水平与疾病临床病理指标及预后的关系，进而在体外探索H.pylori感染对microRNA-223的诱导、microRNA-223对胃癌细胞生长、迁移等的调控作用，，从而揭示microRNA-223在胃癌中的致癌机理与分子基础。本研究共三个章节，各部分的研究目的、方法、结果及结论如下。 第一章microRNA-223在幽门螺杆菌相关胃癌中的表达 一研究目的 探索microRNA-223在胃癌中过表达与H.pylori感染的相关性及其在胃癌中的致癌机制。 二研究方法 我们通过荧光定量PCR和Western blotting鉴定胃癌组织标本中H.pylori感染引起的CagA表达，从而筛选出H.pylori感染阳性和阴性的胃癌标本；然后通过荧光定量PCR测定两组胃癌标本中的microRNA-223表达水平，然后，采用采用Kaplan Meier生存分析等多种统计学方法分析microRNA-223分子表达与生存时间及其他临床病理指标的相关性。 三研究结果 鉴定出38份H.pylori菌感染阳性和27份H.pylori菌感染阴性的胃癌组织标本，H.pylori菌感染阳性标本中CagA在mRNA和蛋白水平的表达量明显高于H.pylori菌感染阴性标本。 H.pylori菌感染阳性的胃癌组织标本中microRNA-223表达量显著高于H.pylori菌感染阴性的胃癌组织标本，前者microRNA-223表达量是后者的2.23倍。 H.pylori菌感染阳性的胃癌组织标本中microRNA-223表达水平与肿瘤大小、肿瘤转移和TNM分期等胃癌患者临床病理指标密切相关，而与患者年龄、细胞分化和PT分期无关；microRNA-223高表达患者的平均生存时间明显低于microRNA-223低表达患者的。 四研究结论 microRNA-223在胃癌中的过表达与H.pylori感染密切相关，microRNA-223表达水平与胃癌的临床病理指标及预后的相关性，提示microRNA-223在胃癌的发生、发展中发挥重要调节作用。 第二章幽门螺杆菌感染体外诱导胃癌细胞miroRNA-223表达研究 一研究目的 本研究拟探索H.pylori感染对胃癌细胞miroRNA-223的表达差异和microRNA加工成熟相关的Drosha和Dicer表达的影响。 二研究方法 通过RT-qPCR技术检测在H.pylori感染不同胃癌细胞株前后，miroRNA-223的表达差异，采用Western blotting和RT-qPCR方法测定H.pylori感染SGC-7901胃癌细胞后Drosha和Dicer在蛋白质和mRNA水平上表达变化。 三研究结果 H.pylori刺激AGS、SGC-7901和MKN-45胃癌细胞中microRNA-223表达； H.pylori刺激SGC-7901胃癌细胞microRNA-223表达具有时间依赖性； H.pylori感染提高SGC-7901胃癌细胞中Drosha和Dicer蛋白表达； H.pylori感染促进SGC-7901细胞Drosha和Dicer的mRNA表达水平。 四研究结论 H.pylori感染诱导AGS、 GES-1、 SGC-7901和MKN45胃癌细胞microRNA-223表达；H.pylori感染诱导SGC-7901胃癌细胞microRNA加工相关的Drosha和Dicer分子表达。 第三章miroRNA-223对胃癌细胞生长、迁移的影响 一研究目的 本研究探索了microRNA-223的模拟物转染胃癌细胞后对细胞生长和迁移等特性的影响，从而为进一步探索microRNA-223的导致胃癌发生的分子机制奠定基础。 二研究方法 通过MTT法测定miroRNA-223和对照microRNA模拟物对胃癌细胞活性的影响；通过CCK-8实验和克隆形成实验测定miroRNA-223对胃癌细胞增殖能力的影响；然后利用划痕试验和测定miroRNA-223对细胞迁移能力的影响，采用Transwell试验和侵袭实验miroRNA-223对细胞侵袭能力的影响。 三研究结果 microRNA-223和对照microRNA模拟物转染可以降低胃癌细胞活性，但两者之间没有显著区别； microRNA-223模拟物可以转染促进胃癌细胞生长，提高胃癌细胞克隆形成能力； microRNA-223模拟物转染促进胃癌细胞迁移能力和侵袭力。 四研究结论 microRNA-223模拟物转染可以促进胃癌细胞生长、提高胃癌细胞克隆形成能力，还可以促进胃癌细胞迁移能力和侵袭力。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2

【共引文献】

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本文编号：1564183