Oct4B1基因过表达增强结直肠癌SW620细胞对奥沙利铂耐药性及机制研究
本文选题：Oct4B1 切入点：结直肠癌 出处：《遵义医学院》2017年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:探讨Oct4B1基因过表达是否增强结直肠癌SW620细胞对化疗药物奥沙利铂的耐药性,及其机制是否与诱导细胞上皮间质转化(EMT)有关。方法:(1)实验分组实验组(SW620-Oct4B1):转染带G418抗性的Oct4B1过表达质粒;对照组(SW620-NC):转染带G418抗性的阴性对照质粒。(2)稳定转染细胞株构建瞬时转染后48h,用RT-q PCR检测两组细胞Oct4B1 m RNA表达,明确瞬时转染效果;用G418筛选建立稳定转染细胞株,用RT-q PCR检测稳定转染细胞Oct4B1 m RNA表达,明确稳定转染效果,稳定转染细胞株用于后续实验。(3)对两组细胞分别作如下检测:(1)MTT法检测细胞对化疗药物奥沙利铂的敏感性;(2)用划痕实验检测细胞迁移能力;(3)用Transwell小室检测细胞侵袭能力;(4)用Western blot法检测细胞EMT相关标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达及耐药蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达。结果:(1)稳定转染细胞株建立结果:瞬时转染48h后Oct4B1 m RNA表达实验组较对照组提高了1.28倍;用800μg/ml的G418建立稳定转染细胞株,稳定转染细胞Oct4B1 m RNA表达水平实验组较对照组提高了2.1倍,实验组明显高于对照组(P0.01)。(2)对稳定转染实验组及对照组细胞检测结果如下:(1)奥沙利铂对两组细胞抑制率的结果显示:随奥沙利铂浓度增加,对两组细胞的抑制率也增加,但实验组较对照组细胞抑制率均明显降低(P0.05);(2)划痕实验结果显示:培养12h两组在划线处伤痕愈合率分别为(32.67±0.67)%及(24.00±1.15)%,实验组明显高于对照组(P0.05);24h两组在划线处伤痕愈合率分别为(67.33±1.20)%及(50.00±2.88)%,实验组显著高于对照组(P0.05);(3)细胞侵袭能力结果显示:培养24h两组穿膜细胞数分别为(397.30±11.85)及(202.30±14.68),实验组显著多于对照组(P0.01);(4)EMT标志物结果显示:两组细胞上皮标志物E-cadherin表达分别为(0.20±0.02)及(0.53±0.01),实验组明显低于对照组(P0.01);而间质标志物N-cadherin表达分别为(0.93±0.02)及(0.67±0.02),实验组显著高于对照组(P0.01);(5)耐药蛋白P-gp结果显示:两组P-gp表达分别为(0.42±0.02)及(0.11±0.01),实验组明显高于对照组(P0.01)。结论:Oct4B1基因过表达能增强结直肠癌SW620细胞对化疗药物奥沙利铂的耐药性,其耐药机制可能与诱导细胞发生EMT过程以及增加P-gp表达有关。
[Abstract]:Objective: to investigate whether overexpression of Oct4B1 gene enhances the resistance of SW620 cells to oxaliplatin, a chemotherapeutic drug. Methods: the experimental group was divided into two groups: SW620-Oct4B1G: Oct4B1 overexpression plasmid with G418 resistance was transfected. Control group SW620-NCX: transfection of negative control plasmid with G418 resistance. 48 h after transient transfection, the expression of Oct4B1 m RNA was detected by RT-q PCR, and the effect of transient transfection was determined by G418 screening, and the stable transfected cell line was established by G418 screening. The expression of Oct4B1 m RNA in stable transfected cells was detected by RT-q PCR, and the effect of stable transfection was determined. The stable transfection cell line was used for further experiment. (3) the two groups of cells were tested as follows: the sensitivity of the cells to the chemotherapeutic drug oxaliplatin was detected by 1: 1 MTT assay) the migration ability of the cells was detected by scratch test) the invasive ability of the cells was detected by Transwell chamber. The expression of E-cadherin (E-cadherin) and P-glycoprotein (P-gp) were detected by Western blot. Results: the expression of Oct4B1 m RNA was detected after 48 hours of transient transfection. The test group was 1.28 times higher than the control group. The stable transfection cell line was established with 800 渭 g / ml G418. The expression level of Oct4B1 m RNA in the stable transfected cells in the experimental group was 2.1-fold higher than that in the control group. The inhibitory rate of oxaliplatin on the cells of the stable transfection group and the control group was as follows: the inhibitory rate of oxaliplatin on the cells of the two groups increased with the increase of oxaliplatin concentration, and the inhibitory rate of oxaliplatin on the cells of the two groups was also increased with the increase of the concentration of oxaliplatin. However, the cell inhibition rate in the experimental group was significantly lower than that in the control group (P 0.05). The results of scratch test showed that the wound healing rates of the two groups were 32.67 卤0.67% and 24.00 卤1.15%, respectively. The rate of wound healing in the experimental group was significantly higher than that in the control group for 24 hours. The invasive ability of the experimental group was significantly higher than that of the control group (P0.05). The results showed that the number of perforating cells in the two groups were 397.30 卤11.85) and 202.30 卤14.68%, respectively. The results showed that the number of cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P0.014EMT marker). The results showed that the number of cells in the experimental group was significantly higher than that in the control group (P0.014EMT marker): the number of perforating cells in the two groups was 397.30 卤11.85) and 202.30 卤14.68%, respectively. The expression of E-cadherin was 0.20 卤0.02) and 0.53 卤0.01 in the experimental group, which was significantly lower than that in the control group (P 0.01), while the expression of N-cadherin was 0.93 卤0.02) and 0.67 卤0.02 in the control group. The expression of P-gp in the experimental group was significantly higher than that in the control group (0.42 卤0.02) and 0.11 卤0.01 (P < 0.01), and the expression of N-cadherin in the experimental group was 0.42 卤0.02and 0.11 卤0.01a respectively, and the expression of N-cadherin in the experimental group was significantly higher than that in the control group. Conclusion the overexpression of 1: Oct4B1 gene can enhance the resistance of SW620 cells to oxaliplatin, a chemotherapeutic drug. The mechanism of drug resistance may be related to the induction of EMT and the increase of P-gp expression.
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.34
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，本文编号：1566966
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