AIMP2-DX2在鼻咽癌细胞迁移侵袭中的作用及其机制研究

发布时间：2018-03-06 09:18

  本文选题：AIMP2-DX2　切入点：鼻咽癌　出处：《暨南大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是来源于鼻咽上皮组织的一种头颈部恶性肿瘤,大多数为非角化未分化癌,其恶性化程度高,极易转移,早期诊断困难。我国是鼻咽癌高发病率国家,在我国南方特别是广东省发病率高。鼻咽癌患者的治疗以放疗和化疗为主,而早期诊断、早期治疗则是挽救患者生命和提高生活质量的有效手段。但鼻咽癌起病隐匿,有较强的转移倾向,转移早,易复发,大约75%左右患者首诊既被确诊为中晚期。鼻咽癌患者的五年生存率维持在70%左右,仍有30%多的患者由于转移和复发不能长期生存。因此,阐明鼻咽癌发生,复发和转移的分子机制,筛选鼻咽癌的肿瘤标志物,寻找治疗新靶点对鼻咽癌诊疗具有重要的临床意义。多能氨酰基-t RNA合成酶作用蛋白(Aminoacyl-t RNA synthetase interacting multifunctional proteins,AIMPs)是人类t RNA合成酶复合物的支架蛋白,也是酰基-t RNA连接酶复合物的核心蛋白。AIMPs家族有三个亚型蛋白:AIMP1,AIMP2,AIMP3。AIMP2(也被称为p38/JTV-1蛋白),是AIMPs家族三个亚型之一,参与多种生物学功能,如细胞分化,细胞凋亡等。最近的研究表明,AIMP2的一个缺少外显子Exon2的转录本AIMP2-DX2也与肿瘤相关,但功能与AIMP2不同。AIMP2-DX2在多种肿瘤细胞系及肿瘤组织中被检测到。与AIMP2类似,AIMP2-DX2也能够结合FBP、TRAF2及p53,故AIMP2-DX2与AIMP2竞争性结合目标蛋白,从而抑制AIMP2的功能,表现为促癌因子。AIMP2-DX2与AIMP2的比例与肺癌病人的恶性程度正相关,与卵巢癌的抗药性正相关。抑制AIMP2-DX2水平可显著抑制肺癌细胞分化及其在裸鼠体内的成瘤。这些研究表明,AIMP2-DX2可能是有潜力的癌症新靶点。基质金属蛋白酶(MMPs)是一组锌依赖型的蛋白水解酶,它主要是负责细胞外基质蛋白的降解和重塑。MMPs在成体组织中的表达和活性相对较低,但在出现病理状况异常的组织中显著增加,例如炎性疾病,肿瘤生长和转移。近年来,MMPs是抗肿瘤侵袭转移机制研究的热点。在各种MMPs成员中,MMP-2和MMP-9与多种肿瘤的侵袭转移表型关系最为密切,其主要作用底物是IV型胶原、明胶、弹力蛋白等,它们是基底膜及ECM的主要成分。基底膜的降解意味着肿瘤的浸润与转移。鼻咽癌组织中MMP-2和MMP-9的活性水平均显著高于正常鼻咽组织,并且与鼻咽癌的临床分期密切相关。文献表明,抑制MMP-2及MMP-9可以抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移。所以,MMP-2及MMP-9对鼻咽癌细胞的侵袭与转移至关重要,是抑制其侵袭及转移的关键靶点。目前AIMP2-DX2在鼻咽癌中的作用未见报道,而AIMP2-DX2调控肿瘤转移的具体机制也亟待阐明,本研究以人高分化鼻咽癌细胞株(CNE-1)为研究对象,拟通过分子克隆、转染、q PCR和T-PCR、western blot等分子生物学手段,流式细胞术、MTT、transwell侵袭及迁移等实验方法,进一步建立CNE-1鼻咽癌细胞的裸鼠成瘤模型,观察AIMP2-DX2对鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,检测基质金属蛋白酶(MMPs)中关键分子MMP-2及MMP-9核酸水平和蛋白水平的变化,阐明MMP-2及MMP-9水平变化与AIMP2-DX2的关系,探讨AIMP2-DX2调控鼻咽癌细胞迁移与侵袭的相关机制。目的(1)明确AIMP2-DX2与鼻咽癌侵袭转移的关系。(2)研究MMP-2及MMP-9水平变化与AIMP2-DX2的关系,探讨AIMP2-DX2调控鼻咽癌细胞迁移与侵袭的相关机制。材料和方法(1)应用免疫组化、Western blot及q RT-PCR技术检测正常鼻咽组织与临床病人鼻咽癌样本中AIMP2-DX2和AIMP2-F(全长)的表达差异。(2)通过Western blot、RT-PCR及侵袭迁移实验比较正常鼻咽细胞与鼻咽癌细胞相关促癌基因的表达情况以及侵袭迁移的情况;构建AIMP2-DX2真核过表达质粒,应用细胞增殖实验、细胞体外侵袭实验,流式细胞术等实验手段观察AIMP2-DX2对肿瘤细胞生长、迁移和侵袭、凋亡的影响。(3)构建沉默sh AIMP2-DX2的CNE-1稳定细胞株,AIMP2-DX2基因沉默对鼻咽癌细胞迁移和侵袭的影响。(4)构建鼻咽癌裸鼠成瘤动物模型,检测沉默AIMP2-DX2对裸鼠鼻咽癌模型皮下成瘤性影响。(5)所有统计处理均用SPSS22.0统计软件进行,数据用均数±标准差(mean±standard deviation,SD)表示,采用方差分析进行差异显著性分析(ANOVA),P0.05表示差异具有统计学意义。结果(1)与正常鼻咽样本相比,临床病人鼻咽癌样本中AIMP2-DX2的表达明显增高,差异有统计学意义(p0.05);AIMP2-F无显著变化;q RT-PCR结果提示鼻咽癌组织与正常鼻咽组织相比AIMP2-DX2的表达明显增高,差异有统计学意义(p0.05);而二者AIMP2-F表达无明显差异。AIMP2-DX2低表达组的5年生存率明显高于AIMP2-DX2高表达组,两者之间差异具有统计学意义(P=0.018),提示AIMP2-DX2的表达量与鼻咽癌患者的预后相关。(2)Transwell小室迁移和Matrigel侵袭实验结果提示CNE-1细胞株中AIMP2-DX2过表达和干扰的结果表明,细胞的迁移和侵袭与AIMP2-DX2的表达成正相关。(3)与人永生化鼻咽上皮细胞系比较,鼻咽癌细胞系中AIMP2-DX2的m RNA水平及蛋白水平升高,基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9的水平升高,细胞的迁移和侵袭能力增强,差异有统计学意义(p0.05)。(4)q RT-PCR及Western blot结果显示sh-AIMP2-DX2慢病毒能明显抑制CNE-1细胞AIMP2-DX2的表达,抑制AIMP2-DX2显著抑制鼻咽CNE-1细胞的迁移和侵袭,同时也能抑制在CNE-1细胞的侵袭和浸润过程中起到重要作用的调节蛋白MMP-2及MMP-9的表达,差异有统计学意义(p0.05)。(5)在裸鼠成瘤模型中,CNE-1细胞系的肿瘤成瘤可被sh-AIMP2-DX2抑制。结论(1)临床病人鼻咽癌组织中AIMP2-DX2的表达明显增高,且与病人预后相关。(2)AIMP2-DX2是调控鼻咽癌细胞增殖,迁移和侵袭能力的充分必要条件(过表达及小分子干扰)。(3)sh-AIMP2-DX2慢病毒能明显抑制CNE-1细胞AIMP2-DX2,沉默AIMP2-DX2基因引发MMP-2及MMP-9基因的表达下调。(4)沉默AIMP2-DX2可抑制CNE-1细胞的迁移和侵袭,可抑制CNE-1细胞的裸鼠模型中的成瘤生长。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.63

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 赵婵静;李江滨;卢雪如;杨旭然;陈梦婷;蔡玉莲;徐光婉;;浅谈联合应用阿司匹林及5-氟尿嘧啶对鼻咽癌细胞的影响[J];求医问药(下半月);2013年08期

2 李智,林素暇,梁英杰;巨噬细胞移动抑制因子提高鼻咽癌细胞体外侵袭能力[J];中华病理学杂志;2004年01期

3 张蕾,王晓华,马秀兰,何安光;EB病毒基因BARF1在鼻咽癌细胞中的表达及意义[J];中国癌症杂志;2004年01期

4 王安宇;鼻咽癌细胞生物节律基础研究和临床时辰治疗现状[J];广西医学;2005年06期

5 吴敬波;崔艳慧;张建文;范娟;文庆莲;;心肌细胞培养液对鼻咽癌细胞生长的体外抑制作用实验研究[J];四川肿瘤防治;2006年02期

6 姚辉璐;朱淼;王桂文;彭立新;何碧娟;何敏;黎永青;;单个鼻咽癌细胞的拉曼光谱分析的研究[J];光谱学与光谱分析;2007年09期

7 杜玲艳;黄丹;詹旭;;鼻咽癌细胞后向偏振散射光谱研究[J];四川理工学院学报(自然科学版);2009年03期

8 苏欣;李仕晟;康竞;谢yN;江静;;靶向阻断表皮生长因子受体信号通路影响鼻咽癌细胞生长的研究[J];实用医学杂志;2009年18期

9 易翔;唐安洲;覃颖;温文胜;谢莹;;一氧化氮对鼻咽癌细胞生长及血管内皮生长因子的调节作用[J];中国癌症防治杂志;2009年03期

10 陈蔚;崔英;岳惠芬;梁新强;;新城疫病毒抑制鼻咽癌细胞的体外实验研究[J];中华肿瘤防治杂志;2010年01期

相关会议论文 前10条

1 陈阳;李永增;陈荣;;鼻咽癌细胞的拉曼光谱[A];中国遗传学会第十届全国激光生物学学术会议论文摘要集[C];2009年

2 焦伟;莫祥兰;;肿瘤坏死因子联合白介素2抗鼻咽癌细胞实验研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

3 姚辉璐;王桂文;何敏;蒋玉艳;黎永青;;单细胞拉曼光谱分析鼻咽癌细胞的研究[A];第六届全国光生物学学术研讨会论文集[C];2004年

4 李步洪;林慧韫;谢树森;;鼻咽癌细胞的荧光光谱特性[A];大珩先生九十华诞文集暨中国光学学会2004年学术大会论文集[C];2004年

5 姚辉璐;王桂文;彭立新;黎永青;;单个鼻咽癌细胞的拉曼光谱分析的研究[A];中国光学学会2006年学术大会论文摘要集[C];2006年

6 王琼;伍钢;;血管紧张素Ⅱ及其受体阻滞剂与放疗联合对鼻咽癌细胞的作用及其机制的研究[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年

7 高健赫;蔡红星;张喜和;;鼻咽癌细胞分泌物的拉曼光谱研究[A];第十六届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2011年

8 冼励坚;孙健;曹弃元;叶燕丽;;鼻咽癌细胞DNA合成的时间节律研究[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年

9 吴敬波;崔艳慧;张建文;范娟;文庆莲;;心肌细胞培养液对鼻咽癌细胞生长抑制作用体外实验研究[A];第九届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2006年

10 张配;赵素容;宋乐乐;浦龙健;蒋志文;刘浩;蒋琛琛;;低分子量肝素联合紫杉醇对鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力的影响[A];促进科技经济结合，，服务创新驱动发展——蚌埠市科协2012年度学术年会论文集[C];2012年

相关博士学位论文 前10条

1 曹庆松;AIMP2-DX2在鼻咽癌细胞迁移侵袭中的作用及其机制研究[D];暨南大学;2017年

2 裴娜娜;Ang-(1-7)过表达对鼻咽癌细胞体内外生长的影响[D];南方医科大学;2015年

3 赵孟阳;miR-3188参与FOXO1调节mTOR-pPI3K/AKT-c-JUN正反馈通路抑制鼻咽癌细胞的增殖[D];南方医科大学;2016年

4 毛承刚;吲哚-3-甲醇抑制鼻咽癌细胞体内和体外生长的研究[D];武汉大学;2014年

5 李国萍;不同侵袭迁移能力鼻咽癌细胞蛋白组学及转移相关基因功能研究[D];昆明医科大学;2012年

6 苗北平;辣根过氧化物酶/吲哚三醋酸酶前药对鼻咽癌细胞的杀伤作用[D];山东大学;2008年

7 徐娟;EB病毒LMP1通过转录因子EGFR调节酪氨酰蛋白硫酸转移酶TPST-1介导趋化因子受体CXCR4活性的分子机制[D];中南大学;2010年

8 吴平;ARC基因在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌细胞放化疗敏感性的研究[D];中南大学;2012年

9 张荔茗;鼻咽癌细胞中“c-Myc/miRNA/靶基因”交互作用分子网络的初步构建及功能研究[D];中南大学;2009年

10 谢李;HSP70调控雷帕霉素对鼻咽癌细胞生长抑制作用分子机制研究[D];中南大学;2010年

相关硕士学位论文 前10条

1 夏玉对;Garcinone抑制鼻咽癌细胞生长及作用机制的体外研究[D];广西医科大学;2015年

2 陈志;EBV-LMP2A诱导鼻咽癌细胞EMT和对其生物学特性的影响[D];南京医科大学;2015年

3 王惠洁;间质蛋白Periostin对鼻咽癌细胞侵袭迁移能力的影响[D];南华大学;2015年

4 黄s

本文编号：1574230