uMtCK在肝癌的表达及作用机制初步研究
本文选题：原发性肝癌 切入点：细胞凋亡 出处：《天津医科大学》2017年博士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：【目的】分析原发性肝癌患者血清及病理组织中uMtCK的表达水平,初步探讨uMtCK对辅助肝癌临床诊断及预后判断的价值;分析uMtCK对肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移作用及机制,探讨uMtCK与肝癌细胞恶性生物学特征的关系。【方法】在临床血清中,采用ELISA方法,检测uMtCK蛋白在慢性乙型肝炎、活动性肝硬化和原发性肝癌患者血清中的表达水平、uMtCK蛋白在肝癌不同临床分期患者血清中的表达水平以及肝癌患者RFA根治性治疗前后血清中uMtCK蛋白的表达水平;根据受试者特征曲线得到曲线下面积(Area under the curve,AUC)探讨uMtCK和AFP对辅助肝癌的诊断价值及联合诊断价值;在临床组织标本中,采用免疫组织化学的方法,检测uMtCK蛋白在慢性乙型肝炎、活动性肝硬化和原发性肝癌不同组织中的表达水平;采用logistic回归方法分析uMtCK蛋白表达水平与肝癌不同临床指标和肝癌恶性生物学特征的关系;在体外肝癌细胞株中采用Real-time PCR方法检测uMtCK蛋白在不同肝癌细胞株中的表达水平;MTT比色法检测uMtCK基因对肝癌细胞的增殖作用;流式细胞术检测uMtCK基因对肝癌细胞凋亡的作用机制;并采用si RNA技术靶向沉默uMtCK基因表达,采用Brdu细胞增殖试验和Transwell小室肿瘤细胞迁移与侵袭实验分析探讨uMtCK基因表达沉默对肝癌细胞株生物学特性的影响。【结果】1、uMtCK蛋白在原发性肝癌患者组血清中的表达水平高于活动性肝硬化组和慢性乙型肝炎组(P0.05);uMtCK蛋白在晚期肝癌亚组患者血清中的表达水平高于早期肝癌亚组(P0.05);肝癌患者血清中uMtCK蛋白浓度为10 U/L临界点诊断各期肝癌组与正常组时,uMtCK检测肝癌的特异度低于AFP(69.8%vs77.4%,P0.05);AFP与uMtCK诊断肝癌的灵敏度及AUC值比较差异无统计学意义(P0.05);AFP与uMtCK联合诊断肝癌的灵敏度及Youden指数高于AFP(P0.05);肝癌组患者RFA根治术治疗后血清中uMtCK表达水平较术前下降(P0.05)。2、uMtCK蛋白在原发性肝癌组织中表达水平高于慢性乙型肝炎及正常肝组织(P0.05);且uMtCK蛋白表达水平与有无门静脉受侵及肿瘤病理分级呈正相关(P0.05)。3、uMtCK基因在体外肝癌细胞株Hep G2、Hu H7中呈高表达,且稳定高表达uMtCK在Hep G2、Hu H7的肝癌细胞株中有促进肝癌细胞增殖作用(P0.05);稳定高表达uMtCK在Hep G2肝癌细胞株中有抑制肝癌细胞凋亡作用(P0.05)。应用si RNA技术靶向沉默uMtCK基因表达后,肝癌细胞增殖能力显著下降(P0.05),且肝癌细胞的迁移和侵袭能力明显受到抑制(P0.05)。【结论】uMtCK蛋白在肝癌患者血清及病理组织中高表达;uMtCK与AFP联合检测诊断肝癌的灵敏度及Youden指数高于AFP;肝癌Ⅲ-Ⅳ期亚组的uMtCK血清表达水平较显著高于肝癌Ⅰ-Ⅱ期亚组,uMtCK在肝癌病理组织表达强度与门静脉癌栓及病理分化水平呈正相关;uMtCK在肝癌细胞株Hep G2、Hu H7中稳定高表达可抑制肝癌细胞凋亡,在肝癌细胞的X椫场⑶ㄒ啤⑶窒裥陨镅形衅鹱糯俳饔谩MtCK有可能成为辅助肝癌血清学诊断标记物,对于肝癌临床分期及预后判断有一定的监测指导意义。
[Abstract]:[Objective] analyze the expression level of primary uMtCK in serum and pathological tissues of patients with hepatocellular carcinoma, preliminary study of uMtCK on diagnosis and prognosis of hepatocellular carcinoma clinical auxiliary value; analysis of uMtCK on hepatocellular carcinoma cell proliferation, apoptosis, invasion and migration effect and mechanism, to explore the relationship between uMtCK and malignant biological characteristics. [method] in in serum, using ELISA method to detect the expression of uMtCK in chronic hepatitis B, liver cirrhosis and primary hepatocellular carcinoma patients serum expression level of uMtCK protein expression in hepatocellular carcinoma in different clinical stages in the serum of patients with liver cancer patients, RFA expression level of uMtCK protein in serum before and after the treatment according to the subjects; the characteristics of curve area under the curve (Area under the curve, AUC) and to evaluate the value of uMtCK and AFP in diagnosis of hepatocellular carcinoma and auxiliary combined diagnosis in clinical specimens; , using immunohistochemical method, the expression of uMtCK protein in chronic hepatitis B, the expression level of liver cirrhosis and primary liver cancer in different tissues; using logistic regression methods to analyze the relationships between the expression of uMtCK protein level and liver cancer in different clinical indicators and malignant biological characteristics; the expression level of uMtCK protein was detected in different hepatocellular carcinoma cell lines using Real-time PCR method in vitro in hepatocellular carcinoma cell line; proliferation detection uMtCK colorimetry of MTT gene on hepatocellular carcinoma cells; for the mechanism of uMtCK gene were detected by flow cytometry on apoptosis of hepatocellular carcinoma cells; and using Si RNA targeted expression of uMtCK gene silencing, the analysis of the effect of uMtCK gene silence on biological the characteristics of hepatocellular carcinoma cell line Brdu cell proliferation assay and Transwell cell tumor cell migration and invasion assay. [results] 1, uMtCK protein in primary The expression level of patients with hepatocellular carcinoma in serum was higher than that of active cirrhosis group and chronic hepatitis B group (P0.05); the expression level of uMtCK protein in the subgroup of patients with advanced hepatocellular carcinoma in serum was higher than that of early cancer subgroups (P0.05); serum uMtCK protein concentration was 10 U/L critical point diagnosis of various stages of liver cancer and normal group group, uMtCK detection of liver cancer specificity is less than AFP (69.8%vs77.4%, P0.05); there was no significant difference between the sensitivity of AUC and AFP and uMtCK in the diagnosis of hepatocellular carcinoma (P0.05); the value of the sensitivity of Youden and AFP combined with uMtCK in diagnosis of hepatocellular carcinoma (P0.05) refers to the number of higher than AFP; liver cancer patients RFA radical operation in the treatment of the expression level of uMtCK decreased serum levels of.2 (P0.05), the expression of uMtCK protein in hepatocellular carcinoma tissues is higher than the level of chronic hepatitis B and normal liver tissue (P0.05); and the expression level of uMtCK protein with and without portal vein invasion and tumor disease Grading was positively correlated (P0.05).3, uMtCK gene in vitro hepatocellular carcinoma cell line Hep G2, Hu H7 showed high expression, stable and high expression of uMtCK in Hep G2, liver cancer cell line Hu in H7 can promote the proliferation of hepatocellular carcinoma cells (P0.05); overexpression of uMtCK can inhibit the apoptosis of hepatocellular carcinoma cells in Hep G2 in hepatocellular carcinoma cell line (P0.05). The application of Si RNA technology targeting uMtCK gene expression and proliferation of HCC cells decreased significantly (P0.05), and the migration and invasion of hepatocellular carcinoma cells was significantly inhibited (P0.05). [Conclusion] the high expression of uMtCK protein in serum and pathological tissues of patients with hepatocellular carcinoma; uMtCK sensitivity in combination with AFP detection in the diagnosis of HCC and Youden index was higher than that of AFP; liver cancer III - IV period subgroup uMtCK serum expression level is significantly higher than that of liver cancer stage subgroup, the intensity of uMtCK and portal vein cancer embolus and pathological differentiation expression in hepatocellular carcinoma tissues Positive correlation; uMtCK in hepatocellular carcinoma cell line Hep G2, Hu H7 in stable high expression can inhibit the apoptosis of hepatocellular carcinoma cells in hepatocellular carcinoma cells X Shan 3 at the beer field room? Pleat shape and americium meteorites???, waxy haiku? Yong man? MtCK could become the auxiliary serological diagnostic marker for HCC, there are certain the monitoring guidance for clinical liver cancer staging and prognosis.
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7
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