ErbB4受体对人胆管细胞癌QBC939细胞系增殖与转移的影响

发布时间：2018-03-10 07:39

  本文选题：胆管癌　切入点：ErbB4　出处：《湖南师范大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分ErbB4在人类胆管癌QBC939细胞系中的表达目的:研究ErbB4受体在人胆管癌QBC939细胞系细胞中的表达情况。方法:体外培养人胆管癌QBC939细胞系细胞,免疫荧光法检测ErbB4在胆管癌细胞中的表达情况。结果:胆管癌QBC939细胞系中表达ErbB4蛋白。结论:人胆管癌QBC939细胞中表达人类第4表皮生长因子受体(ErBb4)。证明本课题组选用QBC939细胞系来进行后续体外实验的可行性。第二部分阻断ErbB4受体对胆管癌QBC939细胞系细胞的增殖、迁移及侵袭的影响目的:考察经AG1478特异性抑制剂阻断ErbB4受体对人胆管癌QBC939细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:分别加入终浓度为0μmol/L,1μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L,100μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用CCK-8法测量各组胆管癌细胞增殖情况,并利用SPSS软件计算AG1478对人胆管癌QBC939细胞的半数抑制浓度(IC50值)。分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用划痕实验检测各组胆管癌细胞迁移能力的变化。分别使用0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L浓度AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用Transwell小室法实验检测各组胆管癌细胞侵袭能力的变化。结果:AG1478以浓度依赖方式抑制QBC939细胞增殖,计算其IC50值为:49.14μmol/L。AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞的迁移、侵袭能力减弱。结论:ErbB4抑制剂能在体外抑制人类胆管癌QBC939细胞增殖、迁移与侵袭。第三部分抑制ErbB4受体能下调iNOS表达目的:研究ErbB4受体实现其肿瘤生物学功能可能的涉及的分子机制。方法:使用50μmol/L浓度阻断ErbB4受体,使用免疫蛋白印迹法测量阻断前后细胞裂解液中iNOS含量,比较阻断胆管癌细胞ErbB4受体能否抑制iNOS表达。分别使用浓度0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用总一氧化氮检测试剂盒检测细胞培养液中NO含量变化。分别使用浓度0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,75μmol/L的AG1478阻断胆管癌细胞ErbB4受体,使用ELISA法检测细胞培养液中VEGF含量变化。结果:AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞裂解液中iNOS含量减少。AG1478抑制ErbB4受体后,胆管癌QBC939细胞培养上清液中NO、VEGF含量减少,间接反映iNOS表达减少。结论:ErbB4抑制剂能在体外抑制人类胆管癌QBC939细胞i NOS表达,并引起其下游NO以及相关因子VEGF分泌减少。
[Abstract]:Part I expression of ErbB4 in QBC939 Cell Line of Human Cholangiocarcinoma objective: to study the expression of ErbB4 receptor in QBC939 cell line of human cholangiocarcinoma. Methods: human cholangiocarcinoma QBC939 cell line was cultured in vitro. The expression of ErbB4 in cholangiocarcinoma cells was detected by immunofluorescence. Results: ErbB4 protein was expressed in QBC939 cell line of cholangiocarcinoma. Conclusion: the expression of human epidermal growth factor receptor ErBb4 in QBC939 cells of cholangiocarcinoma is confirmed by our research group. The feasibility of following in vitro experiment with QBC939 cell line. The second part blocked the proliferation of ErbB4 receptor on QBC939 cell line of cholangiocarcinoma. Objective: to investigate the effect of blocking ErbB4 receptor by specific inhibitor of AG1478 on proliferation, migration and invasion of human cholangiocarcinoma QBC939 cells. Methods: AG1478 of 50 渭 mol / L ~ 75 渭 mol / L ~ 100 渭 mol/L was added to 5 渭 mol / L ~ (5) 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) ~ 10 渭 mol / L ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) ~ 10 渭 mol 路L ~ (-1) AG1478. The proliferation of cholangiocarcinoma cells in each group was measured by CCK-8 method, and the IC50 of AG1478 on QBC939 cells was calculated by SPSS software. The ErbB4 receptor was blocked by 0 渭 mol / L ~ 25 渭 mol / L ~ 50 渭 mol / L ~ (75 渭 mol / L) mol/L AG1478, respectively. The migration ability of cholangiocarcinoma cells in each group was detected by scratch test, and the ErbB4 receptor was blocked by 50 渭 mol / L ~ (75) 渭 mol / L ~ (75 渭 mol / L) AG1478 at 0 渭 mol / L ~ 25 渭 mol / L ~ (25) 渭 mol / L ~ (-1). Transwell chamber assay was used to detect the invasion ability of cholangiocarcinoma cells in each group. Results the proliferation of QBC939 cells was inhibited in a concentration-dependent manner, and the IC50 value of IC50 was calculated to be 1: 49.14 渭 mol/L.AG1478 to inhibit the migration of QBC939 cells in cholangiocarcinoma. Conclusion the inhibitor of ErbB4 can inhibit the proliferation of human cholangiocarcinoma QBC939 cells in vitro. Migration and invasion. Part 3: inhibition of ErbB4 receptor down-regulation of iNOS expression objective: to study the possible molecular mechanisms involved in the realization of tumor biological function by ErbB4 receptor. Methods: ErbB4 receptor was blocked with 50 渭 mol/L. The content of iNOS in cell lysate was measured by Western blot before and after blocking, and the inhibition of iNOS expression by ErbB4 receptor in cholangiocarcinoma cells was compared. AG1478 of 50 渭 mol / L ~ 50 渭 mol / L ~ 50 渭 mol / L ~ (75) 渭 mol/L was used to block ErbB4 receptor of cholangiocarcinoma cells, respectively. Total nitric oxide assay kit was used to detect the changes of no content in cell culture medium. AG1478 of 0 渭 mol / L ~ 25 渭 mol / L ~ (50 渭 mol / L) or 75 渭 mol / L ~ (75 渭 mol / L) was used to block ErbB4 receptor of cholangiocarcinoma cells, and ELISA method was used to detect the change of VEGF content in cell culture medium. The decrease of iNOS content in QBC939 cell lysate of cholangiocarcinoma. AG1478 inhibited the expression of ErbB4 receptor in QBC939 cell culture supernatant of cholangiocarcinoma, which indirectly reflected the decrease of iNOS expression. Conclusion: ErbB4 inhibitor can inhibit iNOS expression of human cholangiocarcinoma QBC939 cells in vitro. It also resulted in a decrease in the secretion of no and related factors VEGF in its downstream.
【学位授予单位】：湖南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.8

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本文编号：1592370