Smad3通过抑制AKT磷酸化增加肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性

发布时间：2018-03-10 15:51

  本文选题：smad3　切入点：顺铂　出处：《华中科技大学》2016年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的：研究smad3在肝癌对顺铂化疗敏感性中的作用方法：建立过表达和低表达smad3的肝癌细胞,利用CCK-8、平板克隆形成实验、细胞凋亡实验、小鼠皮下移植瘤模型和免疫组化从体内和体外两个方面检测肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性,利用western blot检测肝癌细胞smad3下游靶基因的变化。结果：成功构建了过表达smad3的肝癌细胞7721-smad3和低表达smad3的肝癌细胞LM3-shsmad3;高表达smad3的肝癌细胞系对顺铂的化疗敏感性增加；顺铂抑制高表达smad3肝癌细胞皮下移植瘤的生长；高表达smad3的肝癌细胞在顺铂的作用下上调p21cip1和下调c-myc, cyclinD 1, bcl2的表达。结论：smad3通过上调p21Cip1和下调c-myc, bcl2, cyclinD1来增加肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性。这一发现为肝癌的生物学分层和肝癌的个体化治疗提供了新的理论依据。目的：研究非smad通路在smad3增加肝癌化疗敏感性中的作用方法：利用TGFβ1和各种小分子抑制剂检测smad3与非smad通路之间的关系；利用western blot检测顺铂处理肝癌细胞后非smad通路的变化；用顺铂和PI3K/AKT抑制剂处理SMMC-7721和HCC-LM3细胞后,利用CCK8,平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,利用western检测smad3下游转录因子的表达,评价LY294002在低表达smad3诱导的顺铂耐药中的作用。结果：过表达smad3增加了ERK,JNK,p38的磷酸化水平,降低了AKT的磷酸化水平；smad3低表达通过诱导AKT磷酸化增加肝癌对顺铂的耐药；LY294002显著增加smad3低表达细胞中顺铂诱导的细胞凋亡,这一作用在smad3高表达细胞中并不明显；LY294002和顺铂发挥协同作用下调c-myc, cyclinD1, bcl2和上调p21Cip1的表达。结论：smad3通过抑制AKT磷酸化增加肝癌对顺铂的化疗敏感性,顺铂和LY294002联合应用恢复了smad3缺失细胞对顺铂的化疗敏感性,这一结果为常规化疗药物和分子靶向药物的联合应用提供了新的理论依据。
[Abstract]:Objective: to study the role of smad3 in the chemosensitivity of hepatocellular carcinoma to cisplatin. Methods: the overexpression and low expression of smad3 were established in HCC cells. In vivo and in vitro, the chemosensitivity of hepatoma cells to cisplatin was detected in mice subcutaneous transplanted tumor model and immunohistochemistry. Results: hepatoma cells 7721-smad3 and LM3-shsmad3, which overexpressed smad3 and LM3-shsmad3, were successfully constructed and the chemosensitivity to cisplatin was increased in hepatoma cells with high expression of smad3. Cisplatin inhibited the growth of subcutaneous xenografts of hepatoma cells with high expression of smad3. Overexpression of smad3 in hepatoma cells induced by cisplatin up-regulates p21cip1 and down-regulates the expression of c-myc, cyclinD1, bcl2. Conclusion: Smad3 can increase the chemosensitivity of hepatoma cells to cisplatin by upregulating p21Cip1 and down-regulating c-myc, bcl2, cyclinD1. Objective: to study the role of non smad pathway in increasing the chemosensitivity of hepatocellular carcinoma (HCC) by smad3. Methods: TGF 尾 1 and various small molecular inhibitors were used to detect the relationship between smad3 and non smad pathway. Western blot was used to detect the changes of non-#en2# pathway in hepatoma cells treated with cisplatin and PI3K/AKT inhibitor, then CCK8 was used to detect the proliferation of SMMC-7721 and HCC-LM3 cells, and western was used to detect the expression of transcription factors downstream of smad3. To evaluate the role of LY294002 in cisplatin resistance induced by low expression of smad3. Results: overexpression of smad3 increased the phosphorylation level of ERKN JNKP38. Decreased the phosphorylation level of AKT and the low expression of smad3 increased the apoptosis induced by cisplatin in low expression smad3 cells by inducing AKT phosphorylation to increase the resistance of hepatocarcinoma to cisplatin. This effect is not obvious in smad3 overexpression cells. LY294002 and cisplatin play a synergistic role in down-regulating the expression of c-myc, cyclin D1, bcl2 and p21Cip1.Conclusion the chemosensitivity of liver cancer to cisplatin is increased by inhibiting AKT phosphorylation. The combination of cisplatin and LY294002 restored the chemosensitivity of smad3 deletion cells to cisplatin, which provided a new theoretical basis for the combination of conventional chemotherapeutic drugs and molecular targeted drugs.
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

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本文编号：1594021