RASSF1A基因对人胃癌细胞JNK磷酸化的影响
本文选题：RASSF1A基因 切入点：SGC-7901 出处：《南华大学》2015年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：目的:研究RASSF1A基因对人胃癌MGC-803细胞和SGC-7901细胞的JNK磷酸化水平的影响,初步探讨RASSF1A对JNK信号通路的调控在胃癌发生发展过程中的作用。方法:1.体外培养2种不同分化程度的人胃癌细胞(MGC-803细胞和SGC-7901细胞),采用稳定转染法转染RASSF1A基因后,利用Western Blotting分别检测转染前后RASSF1A基因在人胃癌细胞中的表达,验证稳定转染效果;Western Blotting分别检测转染前后RASSF1A基因人胃癌细胞JNK磷酸化水平。2.分别建立稳定转染RASSF1A基因高表达组、未转染组及空质粒对照组人胃癌细胞裸鼠皮下成瘤模型,4-6w后提取瘤体组织,Western-blotting检测JNK磷酸化水平。结果:1.人胃癌MGC-803和SGC-7901细胞通过稳定转染RASSF1A基因后,通过Western Blotting检测发现,与未转染质粒组及pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比,转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组RASSF1A基因蛋白呈高表达,差异有统计学意义(P0.05),提示RASSF1A基因被成功转染至人胃癌MGC-803和SGC-7901细胞,稳定高表达RASSF1A基因2.人胃癌MGC-803细胞系和SGC-7901细胞系成功建立;Western Blotting结果显示:人胃癌MGC-803细胞稳定转染前后,转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组与未转染质粒组及pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比,转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组中P-JNK及JNK表达呈明显下调趋势(P0.05),而未转染质粒组与pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比,差异无统计学意义(P0.05)。2.通过裸鼠成瘤实验,建立稳定高表达、未转染质粒组和pcDNA3.1(+)空质粒转染组的不同分化程度的胃癌细胞(MGC-803和SGC-7901)裸鼠皮下成瘤模型,观察皮下肿瘤生长,4-6w后提取瘤体组织,Western-blotting检测JNK磷酸化水平,Western Blot实验结果显示,与未转染质粒组及pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比,转染pcDNA3.1(+)-RASSF1A质粒组(稳定高表达)所形成的裸鼠瘤体组织中P-JNK及JNK表达呈下降趋势(P0.05),而未转染质粒组与pcDNA3.1(+)空质粒转染组相比,差异无统计学意义(P0.05),以上均提示RASSF1A基因可调控胃癌细胞MGC-803和SGC-7901的JNK磷酸化表达水平。结论:RASSF1A基因可以下调人胃癌MGC-803细胞和SGC-7901细胞JNK磷酸化水平的表达。
[Abstract]:Objective: To study the effect of RASSF1A gene on the phosphorylation of JNK in human gastric cancer MGC-803 cells and SGC-7901 cells, to explore the effect of RASSF1A on the regulation of JNK signaling pathway in gastric carcinogenesis. Methods: Cultured in 2 different differentiation of human gastric cancer cells in vitro (1. MGC-803 cells and SGC-7901 cells), with stable transfection the transfection of RASSF1A gene, were used to detect the expression of RASSF1A gene in human gastric cancer cells before and after transfection with Western Blotting, Western Blotting to verify the stable transfection effect; detection of.2. RASSF1A gene in human gastric cancer cells JNK phosphorylation level before and after transfection were established stable transfection of RASSF1A gene high expression group and non transfection group and empty plasmid control of gastric cancer cells in nude mice subcutaneous tumor model group, extraction of tumor tissue after 4-6w, Western-blotting to detect the phosphorylation of JNK. Results: 1. human gastric carcinoma MGC-803 and SGC- 7901 cells by stable transfection of RASSF1A gene by Western, Blotting detection, and without transfection and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) -RASSF1A high expression plasmid group RASSF1A gene was, the difference was statistically significant (P0.05), suggesting that the RASSF1A gene was successfully transfected into human gastric cancer MGC-803 SGC-7901 and RASSF1A gene in 2. human gastric cancer cells, MGC-803 cells and SGC-7901 cells with high and stable expression was successfully established; Western Blotting showed that after transfection of human gastric cancer MGC-803 cells stable transfected pcDNA3.1 (+) -RASSF1A plasmid group and untransfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) the expression of -RASSF1A P-JNK and JNK plasmid group was significantly decreased (P0.05), and non transfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, the difference was not statistically significant (P0.05.2.) by naked Mouse xenograft experiments, to establish a stable high expression, without transfection and pcDNA3.1 (+) of different degree of differentiation of gastric cancer cells in the empty plasmid group (MGC-803 and SGC-7901) in nude mice subcutaneous tumor model of subcutaneous tumor growth, tumor tissue 4-6w extraction, Western-blotting detection of JNK phosphorylation, Western Blot results display, and without transfection and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, transfected with pcDNA3.1 (+) -RASSF1A plasmid group (high expression) decreased P-JNK and JNK expression in the tumor tissue formed in (P0.05), and non transfected plasmid group and pcDNA3.1 (+) compared with empty plasmid transfection group, the difference was not statistically significant (P0.05), all suggest that the RASSF1A gene MGC-803 and SGC-7901 regulate gastric cancer cells JNK phosphorylation expression levels. Conclusion: RASSF1A gene can downregulate human gastric cancer MGC-803 cells and SGC-7901 cells, the phosphorylation of JNK in water A flat expression.
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
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，本文编号：1652081
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