石蒜碱对膀胱癌细胞T24的作用及机制初探

发布时间：2018-03-27 15:05

本文选题：膀胱癌　切入点：石蒜碱　出处：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景膀胱癌是常见的泌尿系统肿瘤,原发病例中75%属于浅表性膀胱癌(TIS、Ta或T1期),浸润性膀胱癌占了原发病例中的25%(T2-T4期)。浅表性膀胱癌的治疗手段,主要包括两种方法预防肿瘤复发:腔内切割手术治疗,术后膀胱灌注化疗。而目前浸润性膀胱癌的主要治疗手段,选取的是膀胱根治性全切除术,联合术后辅助化疗。尽管膀胱癌的治疗手段五花八门多种多样,50%-70%的浅表性肿瘤患者中,依然出现复发和浸润性肿瘤向远处转移的难题。5年生存率的数据证实,浸润性膀胱癌患者仅有14-30%。在临床对膀胱癌的治疗中,出现化疗药物的耐药性,总体而言,膀胱癌的治疗疗效目前仍然难以令人满意。所以,新的靶向药物治疗膀胱癌能否找到,并解决其治疗膀胱癌的中出现耐药性,这问题十分重要。石蒜碱是一种苄基苯乙胺类生物碱,英文名为lycorine,分子量为287.313,可从我国传统中药--石蒜中分离得到,森岛库太(日本)在1937年最早分离出来。研究表明,石蒜碱类衍生物具有抗炎、抗寄生虫、抗疟疾以及抗病毒作用。除此之外,还可抑制乙酰胆碱酯酶活性、心血管保护功能,抑制肿瘤细胞生长。最近还发现其有导致破骨细胞抑制生成的生物学作用。石蒜碱类衍生物在近年来,国内外合成了多种。目前出现的有盐酸石蒜碱,英文名为Lycorine hydrochloride,氧化石蒜碱,英文名为Lycobetaine,二氢石蒜碱,英文名为Dihydrolycorine,伪石蒜碱,英文名为Pseudolycorine等。虽然石蒜碱已经在多种肿瘤中做了各种作用及机制的研究,目前石蒜碱对膀胱癌细胞,尚未有较系统的研究。目的探讨石蒜碱对人膀胱癌细胞T24及移行上皮细胞SVHUC的作用,观察石蒜碱对膀胱癌细胞与移行上皮细胞的细胞抑制作用,探索石蒜碱可能的作用机制;为治疗人膀胱癌寻找新的思路。方法一、石蒜碱对膀胱癌细胞T24及移行上皮细胞SVHUC生长抑制作用的影响1.1采用MTS法检测石蒜碱对人膀胱癌细胞T24的生长抑制率1.2 hoechst33342检测石蒜碱对膀胱癌细胞T24及移行上皮细胞SVHUC凋亡细胞的比例二、石蒜碱对膀胱癌细胞T24作用机制初探2.1实时荧光定量PCR分析凋亡相关通路基因转录水平的变化2.2 Western-blot分析凋亡相关通路蛋白的变化2.3免疫荧光检测石蒜碱对人膀胱癌细胞株T24细胞内P-Akt和cleaved-caspase-3 表达的影响三、石蒜碱对人膀胱癌细胞T24皮下成瘤能力的影响结果1石蒜碱对膀胱癌细胞T24生长抑制作用的影响1.1石蒜碱对T24细胞作用12h,24h,48h,72h的半数抑制浓度分别为46.9,14.7,7.5,and 3.6 uM。1.2 hoechst33342测得细胞凋亡比例:T24实验组(46%),T24对照组(1%),SVHUC 实验组(5%),SVHUC 对照组(3%)。2石蒜碱对膀胱癌细胞T24作用机制初探2.125uM石蒜碱处理T24细胞后,实时荧光定量PCR检测发现,Bax基因表达下降,Bcl-2表达升高,Akt无显著性改变。2.2不同浓度石蒜碱处理T24细胞后,Western-blot结果显示25μmol/L及50μmol/L的石蒜碱即能上调PTEN、cleaved-caspase-3表达,而下调P-Akt、caspase-3的表达。而Akt蛋白水平则变化不大。2.3免疫荧光结果显示:PBS作用后,P-AktSer473在膀胱癌细胞T24中呈强荧光着色;而与DMSO组相比较,25μg/ml石蒜碱处理后,T24细胞内荧光着色逐渐减弱。相反,cleaved-caspase-3在膀胱癌细胞T24中呈弱荧光着色;而与PBS组相比较,25μg/ml石蒜碱处理后,T24细胞内荧光着色明显增强。3石蒜碱对膀胱癌细胞T24皮下成瘤能力的影响石蒜碱对前列腺癌细胞皮下成瘤能力的影响:与PBS对照组相比,实验组(5mg)及实验组(10mg)均能显著抑制移植瘤的生长速度和肿瘤体积(p0.05),而实验组(5mg)和实验组(10mg)注射组组间亦有显著性差异(p0.05)。结论1.石蒜碱对膀胱癌细胞T24有生长抑制作用2.石蒜碱对膀胱癌细胞T24有凋亡诱导作用。3.石蒜碱可能通过抑制P-Akt及相关信号通路发挥对膀胱癌细胞T24的抗肿瘤作用。4.石蒜碱可显著抑制膀胱癌细胞T24的皮下成瘤能力。
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【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.14

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