从2株链霉菌次级代谢产物中寻找新化合物以及抗霉素6个组分的高速逆流分离

发布时间：2016-11-09 08:36

  本文关键词：肿瘤多药耐药性产生机制及其逆转的研究现状，由笔耕文化传播整理发布。

《福建医科大学》 2011年

从2株链霉菌次级代谢产物中寻找新化合物以及抗霉素6个组分的高速逆流分离

王娇艳  

【摘要】：微生物药物研发是指综合应用现代分离纯化及分析检测技术从微生物次级代谢产物中寻找具有一定生物活性的新化合物,并将其开发成临床药物的过程。微生物次级代谢产物具有多样性,因此,从现有菌株出发综合运用各种分离纯化手段,对其次级代谢产物进行研究,从而获得新化合物就成为微生物研发的一个行之有效的途径。 玫瑰孢链霉菌FIM99608是达托霉素的产生菌。本论文综合应用大孔树脂柱层析以及高压制备液相色谱技术等分离技术从其次级代谢产物中获得2个不同于达托霉素及其同系物的新化合物Y和Z。通过紫外、红外、高效液相色谱、质谱、核磁共振波谱等现代波谱学技术对这2个化合物的结构进行解析确证,证明化合物Y和Z是由6个氨基酸组成的环状脂肽类化合物。化合物Y和Z在抗细菌、抗真菌以及抗肿瘤活性试验结果均为阴性。 链霉菌FIM040512是抗霉素的产生菌。本论文从其发酵液中分离得到一个次级代谢产物—化合物X。应用硅胶柱层析以及重结晶纯化后进行结构解析,确认化合物X是一个异黄酮类化合物。对化合物X的生物活性进行初步筛选发现,化合物X对枯草芽孢杆菌具有很好的活性,对宫颈癌细胞(HeLa)、肺癌细胞(SGC7901)和食管癌细胞(KYSE510、TE3)的生长增殖具有明显的抑制作用。在高浓度时可以引起细胞死亡,随着作用时间的延长,低浓度亦表现出对肿瘤细胞生长的抑制作用。 本论文将高速逆流色谱技术应用于抗霉素的分离,成功开发出一种快速的分离抗霉素各组分的新方法。以正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水5:2:4:1(V:V:V:V)为溶剂体系成功分离6个抗霉素组分(组分I～VI),并根据抗霉素在负离子模式下产生特征离子碎片峰的裂解规律,对分离得到的6个抗霉素组分进行快速鉴别,其中组分I、II、III、IV分别是A_4(a or b),A_3(a or b),A_8(a or b),A_2(a or b),组分V和VI为抗霉素A_1(a or b)的两个同分异构组分。

【关键词】：
【学位授予单位】：福建医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2011
【分类号】：R914
【目录】：

中文摘要10-12

ABSTRACT12-14

常用英文缩写词14-15

第一部分 引言15-29

1. 微生物药物的重要性15-16

2. 研究依据16-23

3. 研究目的23-29

第二部分 材料与方法29-47

1. 实验材料29-35

1.1. 主要仪器29-31

1.2. 微生物次级代谢产物来源菌株31

1.3. 抗菌实验指示菌31-32

1.4. 抗肿瘤实验所用癌细胞株32

1.5. 主要试剂与耗材32-35

2. 实验方法35-47

2.1. 微生物次级代谢产物的发酵35-40

2.1.1. 玫瑰孢链霉菌 FIM99608 的发酵35-38

2.1.2. 链霉菌 FIM040512 的发酵38-40

2.2 微生物次级代谢产物的分离纯化方法40-43

2.2.1. 大孔吸附树脂柱层析40-41

2.2.2. 硅胶柱层析41-42

2.2.3. 高效液相色谱42

2.2.4. 高压制备液相色谱42

2.2.5. 高速逆流色谱42-43

2.2.6. 重结晶43

2.3. 化合物的结构鉴定43-44

2.3.1. 核磁共振43

2.3.2. 质谱43

2.3.3. 紫外吸收光谱43

2.3.4. 红外吸收光谱43-44

2.4. 生物活性测定44-47

2.4.1. 抗细菌实验44

2.4.2. 抗真菌实验44

2.4.3. 抗肿瘤实验44-47

第三部分 结果与分析47-74

1. 玫瑰孢链霉菌FIM99608 次级代谢产物中2 个新化合物Y 和Z 的分离纯化、结构鉴定以及生物活性测定47-58

1.1. 玫瑰孢链霉菌 FIM99608 的发酵培养及发酵液预处理47-50

1.2. 化合物 Y 和 Z 的分离纯化50-52

1.3. 化合物 Y 和 Z 的结构鉴定52-56

1.3.1. 化合物 Y 的结构解析52-54

1.3.2. 化合物 Z 的结构解析54-56

1.4. 化合物 Y 和 Z 的生物活性测定56-58

1.4.1. 抗细菌活性测定56

1.4.2. 抗真菌活性测定56

1.4.3. 抗肿瘤活性测定56-58

2. 链霉菌FIM040512 次级代谢产物中化合物X 的分离纯化、结构鉴定以及生物活性测定58-66

2.1. 链霉菌 FIM040512 的发酵培养及发酵液预处理58-59

2.2. 化合物 X 的分离纯化59

2.3. 化合物 X 的结构鉴定59-62

2.4. 化合物 X 的生物活性测定62-66

2.4.1. 抗细菌活性测定62-63

2.4.2. 抗真菌活性测定63

2.4.3. 抗肿瘤活性测定63-66

3. 链霉菌FIM040512 产生的抗霉素6 个组分的高速逆流分离66-74

3.1. 链霉菌 FIM040512 的发酵培养及发酵液预处理66

3.2. 含抗霉素 6 个组分粗品的制备66

3.3. 高速逆流色谱法用于分离 6 个抗霉素组分66-70

3.3.1. 高速逆流色谱溶剂体系确定66-67

3.3.2. 抗霉素 6 个组分的分离67-70

3.4. 质谱鉴定分离得到的 6 个抗霉素组分70-74

第四部分 讨论74-79

第五部分 结论79-80

参考文献80-89

致谢89-90

附图90-118

综述118-143

参考文献132-143

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