ANXA5在肝内胆管癌组织中的表达及ANXA5-shRNA对QBC939细胞生物学效应研究

发布时间：2018-03-31 11:48

本文选题：ICC　切入点：ANXA5　出处：《南京医科大学》2016年博士论文

【摘要】：第一部分ANXA5在肝内胆管癌组织中的表达和意义目的:比较研究 ANXA5(Annexin A5,膜联蛋白 A5)在 ICC(intrahepatic cholangio-carcinoma,肝内胆管癌)组织中的表达,ANXA5表达与临床病例特征之间的关系,以及ANXA5表达对生存率的影响。方法:根据入选标准,选取江苏省人民医院和苏北人民医院2005年6月至2014年6月间共86例肝内胆管癌患者,应用Western Blotting和免疫组化法检测ICC癌组织与相应的癌旁组织中ANXA5的表达情况,用统计学方法研究ICC组织ANXA5表达情况与患者临床病例特征的关系。根据随访结果,比较ANXA5高表达对患者生存率的影响。结果:ANXA5蛋白在ICC组织中的表达水平均明显高于相应的癌旁组织,统计学有差异(P0.05)。ANXA5蛋白的表达高低与ICC肿瘤直径无相关性(P=0.6349);但是与ICC的分化程度、淋巴结转移有无转移、有无门静脉癌栓有关(P0.05)。ANXA5高表达组的生存期较低表达组要短(p0.05)。结论:ANXA5在ICC中高表达,且表达的高低与ICC的分化程度、淋巴结转移与否、有无门静脉癌栓有关。ICC患者中,ANXA5高表达者比低表达者生存期短。第二部分ANXA5-shRNA慢病毒载体构建和包装目的:比较两种人胆管癌细胞系QBC939和RBE中的ANXA5的表达情况,选择ANXA5表达高的QBC939细胞进入RNAi实验。构建ANXA5-shRNA慢病毒载体,和其他辅助包装质粒一起共同转导入293T细胞,包装后形成LV-ANXA5-RNAi慢病毒,转染QBC939细胞用于基因敲减ANXA5的表达。方法:针对ANXA5-mRNA的不同位点人工设计3条寡核苷酸链,以GV248慢病毒载体,构建psc16759-1,psc16760-1,psc16761-1三种质粒,再感染293T细胞(慢病毒包装细胞),得到三种 LVpsc16759-1,LVpsc16760-1,LVpsc16761-1三种病毒。三种病毒再感染QBC939细胞,经过qPCR检测,筛选出符合要求的病毒。结果:得到了三种RNA干扰病毒,分别为LVpsc16759-1,LVpsc16760-1,LVpsc 16761-1,经过qPCR检测,ANXA5的基因敲减率分别为89.2%、77.1%、32.9%。LVpsc16759-1病毒对ANXA5基因敲减效率达到89.2%,可以用于后续的细胞功能学研究。结论:ANXA5-shRNA慢病毒载体构建成功,LVpsc16759-1慢病毒转染QBC939细胞基因敲减效率高,可用于下一步实验。第三部分ANXA5-shRNA对QBC939细胞的体外抑制作用目的:通过ANXA5-shRNA的干扰,使QBC939细胞ANXA5蛋白表达下调,探讨其干扰后对QBC939细胞生物学效应。方法:采用MTT法检测实验组和对照组QBC939细胞的增殖情况;用流式细胞仪检查QBC939-ANXA5-shRNA的凋亡情况;用细胞划痕实验观察各组细胞的随意运动能力变化;用Transwell实验检测转染细胞的穿膜侵袭能力。结果:实验组QBC939细胞增殖明显较对照组减慢(p0.05),干扰前后细胞凋亡明显增加(p0.05),干扰后的QBC939迁移能力明显下降(p0.05),其穿过基底膜的细胞数量也明显减少(p0.05)。结论:ANXA5-shRNA转染后不仅抑制QBC939细胞的增殖,诱导QBC939细胞的凋亡,还可以抑制QBC939细胞的侵袭能力,可为以后的研究提供实验依据。
[Abstract]:The expression of ANXA5 and ANXA5 in the tissues of intrahepatic cholangiocarcinoma were studied by Western Blotting and immunohistochemistry . The effects of ANXA5 - shRNA on the proliferation of QBC939 cells were investigated by MTT assay .

【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.8

【参考文献】