RNA干扰CXCR4与CXCR7对子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤生长的影响

发布时间：2018-04-01 04:47

本文选题：Ishikawa细胞系　切入点：裸鼠　出处：《青岛大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:1.建立子宫内膜癌(Endometrial carcinoma,EC)裸鼠移植瘤模型;2.探讨应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)沉默CXCR4和/或CXCR7基因表达后对EC裸鼠移植瘤生长的影响及其可能机制。方法:1.将Ishikawa细胞悬液(肿瘤细胞浓度为5×107/ml)移植到SPF级雌性裸小鼠肩胛背部皮下建立EC裸鼠移植瘤模型,每只裸鼠注射所用Ishikawa细胞悬液体积均为0.2 ml。2.设计并合成化学修饰(2’Ome+5’Chol)的CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA和Negative-siRNA;当移植瘤的最大直径为5~7 mm时,将全部载瘤裸鼠随机分成如下五组(每组6只):CXCR4-siRNA治疗组、CXCR7-siRNA治疗组、CXCR4-siRNA+CXCR7-siRNA联合治疗组、Negative-siRNA阴性对照组以及生理盐水对照组,对各实验组每只裸鼠的皮下移植瘤体内给予注射CXCR4-siRNA和/或CXCR7-siRNA、Negative-siRNA或生理盐水,注射液体积均为50μl,每3 d一次,共治疗6次。3.实验过程中,每日观察所有载瘤裸鼠的生活状况及皮下移植瘤生长情况,每3d使用游标卡尺测量各移植瘤的长径a和短径b,按照公式(V=a×b2/2,mm3)计算移植瘤体积大小,并绘制各实验组移植瘤体积生长变化曲线。4.6个治疗周期结束后,脱颈处死所有荷瘤裸鼠,超净工作台上完整剥离所有移植瘤,游标卡尺和电子称分别测得各移植瘤的长、短径(mm)和瘤体质量(g),并计算抑瘤率(%)。5.采用SYBR GREEN实时荧光定量RT-PCR、Western Blotting以及免疫组织化学技术检测各移植瘤中CXCR4、CXCR7的mRNA或蛋白表达水平,以验证CXCR4-siRNA与CXCR7-siRNA对相应基因的沉默效果;并采用PCNA染色法和TUNEL法检测各实验组移植瘤组织中EC细胞增殖能力和凋亡水平的差异。结果:1.采用Ishikawa细胞悬液接种法成功建立了EC裸鼠皮下移植瘤模型。2.CXCR4-siRNA与CXCR7-siRNA单独或联合治疗均可显著抑制EC裸鼠移植瘤的生长,3个治疗组的移植瘤体积和体质量的生长速度均明显小于2个对照组(P0.01);相比于生理盐水对照组,CXCR4-siRNA治疗组、CXCR7-siRNA治疗组、CXCR4+CXCR7-siRNA联合治疗组的抑瘤率分别为58.77%、56.61%和55.85%,而阴性对照组的抑瘤率仅为9.24%,并且2个对照组之间的差异无统计学意义(P0.05)。3.实时荧光定量RT-PCR、Western Blotting以及免疫组织化学技术检测结果分析均得出:移植瘤体内直接注射2’Ome+5’Chol修饰的CXCR4-siRNA和CXCR7-siRNA可明显下调移植瘤组织中相应基因mRNA与蛋白的表达(P0.01)。4.PCNA染色法检测分析显示:移植瘤体内单独或联合注射CXCR4-siRNA与CXCR7-siRNA后,EC细胞增殖能力均显著下降(P0.01),但3个治疗组中肿瘤细胞的增殖抑制效果相当(P0.05),即CXCR4与CXCR7二者联合沉默不能产生更的增殖抑制效应;而TUNEL法凋亡检测结果提示各实验组移植瘤中EC细胞凋亡率的差异无统计学意义(P0.05)。结论:采用siRNA靶向沉默CXCR4和/或CXCR7基因表达后,子宫内膜癌Ishikawa细胞裸鼠移植瘤的生长速度明显减缓,可以显著抑制EC细胞的增殖能力。实验结果提示CXCR4与CXCR7在EC发生发展过程中起着极其重要的作用,有望成为EC基因治疗的新靶点。
[Abstract]:Objective : 1 . To establish a model of transplanted tumor of nude mice with endometrial carcinoma ( EC ) in nude mice . The effects of CXCR4 - siRNA , CXCR4 - siRNA and negative - siRNA on the growth of transplanted tumor in nude mice were studied by using SYBR green real - time fluorescence quantitative RT - PCR , Western Blotting and immunohistochemistry . The results showed that the growth rate of tumor cells in the transplanted tumor cells was significantly lower than that in the control group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.33

【参考文献】