胞质M-CSF对人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢的影响及其机制
本文选题：M-CSF 切入点：糖代谢 出处：《南华大学》2015年硕士论文
【摘要】：目的:探讨巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)对人乳腺癌MCF-7细胞糖代谢的影响及其机制。方法:胞质稳定转染M-CSF的MCF-7细胞(MCF-7-M)系由实验室构建。常规培养MCF-7-M细胞、亲本MCF-7细胞。ATP检测试剂盒分析MCF-7-M细胞和MCF-7细胞的ATP生成。葡萄糖测定试剂盒、乳酸测试盒测定MCF-7-M细胞和MCF-7细胞的葡萄糖消耗和乳酸分泌情况。蛋白印迹法分析在PI3K抑制剂和AKT抑制剂预处理前后,M-CSF对MCF-7细胞的糖酵解关键酶HK2和PKM2,葡萄糖转运体GLUT-1表达的影响。MTT法观察在ATP消耗剂预处理前后,MCF-7和MCF-7-M细胞对5-FU敏感性的变化情况。结果:ATP检测分析显示:MCF-7-M细胞的ATP水平显著高于MCF-7细胞(p0.05),糖酵解抑制剂2-DG降低MCF-7细胞(p0.05)和MCF-7-M细胞的(p0.01)ATP水平,与MCF-7细胞比较,2-DG降低MCF-7-M细胞ATP的效应更明显。氧化磷酸化抑制剂OLIG和溶媒分别对MCF-7细胞和MCF-7-M细胞的ATP水平影响均不明显(p0.05)。葡萄糖摄取和乳酸分泌实验显示:MCF-7-M细胞的糖摄取能力显著高于MCF-7细胞(p0.01),MCF-7-M细胞乳酸分泌含量分别显著高于对应的MCF-7细胞(p0.01);经API-2处理后,MCF-7细胞(p0.05)和MCF-7-M细胞(p0.01)葡萄糖消耗均降低,乳酸分泌量均显著减少(p0.01)。蛋白印迹实验显示:MCF-7-M细胞GLUT-1(p0.05)、HK2(p0.05)和PAM2(p0.01)的表达显著高于MCF-7细胞;LY294002或API-2均可抑制MCF-7-M细胞GLUT-1的表达(p0.05)。MTT实验显示:用3-Br PA预处理,MCF-7-M细胞和MCF-7细胞对5-FU的药物敏感性显著增强(p0.01)。结论:胞质M-CSF通过诱导GLUT-1、HK2和PKM2的蛋白表达,活化MCF-7细胞糖酵解途径,PI3K/AKT信号通路参与胞质M-CSF活化MCF-7细胞糖酵解途径。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of macrophage colony stimulating factor (M-CSF) on glucose metabolism of human breast cancer MCF-7 cells and its mechanism.Methods: the cytoplasmic stable transfected MCF-7 cells MCF-7-M were constructed by laboratory.MCF-7-M cells were cultured routinely. The ATP production of MCF-7-M cells and MCF-7 cells was detected by MCF-7 assay kit.Glucose consumption and lactate secretion in MCF-7-M and MCF-7 cells were measured by glucose assay kit and lactate test kit.Effects of M-CSF on the expression of HK2 and PKM2 in MCF-7 cells before and after pretreatment with PI3K inhibitor and AKT inhibitor, and GLUT-1 expression of glucose transporter. MTT assay was used to observe the effect of MCF7 and MCF-7-M cells on 5-FU before and after pretreatment with ATP expensor.A change in sensitivity.Results the level of ATP in MCF-7-M cells was significantly higher than that in MCF-7 cells. The glycolytic inhibitor 2-DG decreased the level of p0.05 in MCF-7 cells and MCF-7-M cells. Compared with MCF-7 cells, 2-DG decreased the ATP level of MCF-7-M cells more significantly than that of MCF-7 cells.The effects of oxidative phosphorylation inhibitor OLIG and solute on the ATP level of MCF-7 cells and MCF-7-M cells were not significant (P 0.05).The glucose uptake and lactate secretion of MCF-7-M cells were significantly higher than those of MCF-7 cells, the lactate secretion levels of MCF-7-M cells were significantly higher than those of MCF-7 cells, and the glucose consumption of MCF-7 cells and MCF-7-M cells were decreased after API-2 treatment.The secretion of lactic acid decreased significantly (P 0.01).Conclusion: cytoplasmic M-CSF induces the expression of GLUT-1 hk2 and PKM2, and activates the glycolysis pathway of MCF-7 cells via PI3K / AKT signaling pathway, which is involved in the activation of glycolysis pathway of MCF-7 cells by cytoplasmic M-CSF.
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
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，本文编号：1701000
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