左氧氟沙星醛缩对甲氧苯乙酮诱导肝癌细胞凋亡和自噬作用的研究

发布时间：2018-04-03 05:20

  本文选题：自噬　切入点：凋亡　出处：《河南大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的探讨不同浓度的左氧氟沙星醛缩对甲氧苯乙酮(6-氟-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-1,8-(2-甲基亚乙氧基)-1,4-二氢-4-氧-3-(4-甲氧基苯乙烯基)喹啉)(HGQ5)诱导人肝癌细胞SMMC-7721细胞发生凋亡和自噬,并分析凋亡与自噬的关系及作用机制。方法用不同浓度的HGQ5处理SMMC-7721细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测HGQ5对SMMC-7721细胞的增殖抑制效应、检测氯喹(CQ)在12 h和48h时对SMMC-7721细胞生长的影响、检测HGQ5和HGQ5联合氯喹处理SMMC-7721细胞48h对细胞的影响;用DAPI染色法观察SMMC-7721细胞凋亡形态变化;TUNEL法测定HGQ5和HGQ5联合氯喹后细胞凋亡率;间接免疫荧光法检测细胞LC3和p62蛋白的变化;蛋白质印迹技术检测HGQ5作用于SMMC-7721细胞后p62表达量、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ表达量与比值的变化;用自噬抑制剂CQ联合HGQ5探讨p62表达量、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ表达量与比值的变化。结果HGQ5浓度分别为1.25μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L和10μmol/L,处理SMMC-7721细胞24 h,与0μmol/L HGQ5浓度组比较,细胞凋亡率分别为30.06%(P0.05)、39.12%(P0.01)、51.71%(P0.05)和65.22%(P0.01),细胞半数致死率(IC50)值为5.0μmol/L,并且HGQ5在不同浓度作用细胞48h和72h细胞IC50值分别为4.5μmol/L和4.48μmol/L,说明处理细胞在不同时间和不同浓度HGQ5均可显著抑制SMMC-7721细胞的生长增殖,生存率呈浓度依赖关系。氯喹处理细胞12 h和48 h在6.25μmol/L浓度时,与对照组0μmol/L氯喹相比,差别没有统计学意义(P0.05)、HGQ5联合氯喹处理SMMC-7721细胞48 h后,在低剂量(0.3125-2.5μmol/L)对细胞生长抑制率高于单独HGQ5组,在高剂量(5.0-10μmol/L)则相反;DAPI染细胞核,随HGQ5浓度增加可见典型细胞凋亡特征性如细胞固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体;TUNEL检测显示单独使用HGQ5细胞凋亡率较对照组相比差别有统计学意义(P0.01),HGQ5可显著诱导SMMC-7721细胞凋亡,TUNEL检测HGQ5联合CQ后细胞凋亡率,HGQ5(1.25μmol/L)联合氯喹组细胞凋亡率高于HGQ5单独处理组,HGQ5(5.0μmol/L)联合氯喹组的细胞凋亡率低于HGQ5单独处理组(P0.05),说明HGQ5诱导SMMC-7721细胞凋亡与自噬相关。间接免疫荧光观察HGQ5诱导SMMC-7721细胞自噬,自噬标志物LC3在细胞核附近密度增高;Western-Blot结果显示,相同浓度(5.0μmol/L)不同时间处理SMMC-7721细胞时,LC3-Ⅱ和p62的表达量分别在6 h、12 h、24 h和3 h、6 h、12 h时表达增高,较0 h对照组相比,差别有统计学意义(P0.05);HGQ5处理SMMC-7721细胞不同时间和浓度p62蛋白表达呈时间、浓度依赖性;HGQ5联合氯喹处理SMMC-7721细胞12 h和48 h p62蛋白表达对比,48 h时p62蛋白表达量高于12 h表达量(P0.05)。结论1左氧氟沙星醛缩对甲氧苯乙酮(HGQ5)诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡。2HGQ5对SMMC-7721细胞自噬具有诱导作用。3在低剂量HGQ5作用于SMMC-7721细胞时,自噬过程对细胞具有保护作用,而在高剂量HGQ5作用时,自噬则促进HGQ5对SMMC-7721细胞的杀伤作用,且上述作用的机制与细胞凋亡有关。
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本文编号：1703805