miR-210对缺氧状态下胃癌细胞侵袭转移的影响及其作用机制研究
本文选题：胃肿瘤 切入点：microRNA-210 出处：《浙江大学》2016年博士论文
【摘要】：第一章 miR-210在胃癌组织中的表达及其与临床病理因素及预后的相关性研究目的：探讨microRNA-210(miR-210)在胃癌(gastric cancer, GC)组织中的表达及其临床意义。方法：检测78例胃癌组织及相应的癌旁组织中miR-210的表达情况,分析其与临床病理因素及预后的关系。结果：实时定量PCR发现,miR-210在胃癌组织中的表达高于癌旁组织,两者相比较有统计学差异(P0.05)。MiR-210的表达与肿瘤大小(P=0.022)、淋巴结转移(P=0.018)和TNM分期(P=0.034)密切相关。MiR-210低表达患者5年生存率为48.2%,MiR-210高表达患者5年生存率为30.4%,差异具有统计学意义(χ2=4.216,P=0.040)。结论：1.与癌旁组织比较,胃癌组织中miR-210的表达明显增加,提示miR-210可能与胃癌的发生发展有关。2.MiR-210表达水平与胃癌临床分期及转移潜能有关,并可作为判断预后的可靠指标。第二部分 缺氧对胃癌细胞侵袭转移的影响及miR-210的作用研究目的：观察缺氧状态对胃癌细胞增殖、侵袭能力及EMT过程的影响,研究miR-210在这一过程中的可能作用。方法：采用LipofectamineTM 2000转染hsa-mir-210 inhibitor于胃癌细胞株中,敲低miR-210的表达,实时定量PCR检测常氧、缺氧及缺氧miR-210抑制状态下胃癌细胞miR-210的表达,MTT法、Transwell侵袭实验和western blot分别检测细胞增殖、侵袭能力及EMT相关蛋白的变化。结果：与常氧组相比,缺氧组miR-210表达显著上调(P0.05)；与缺氧组相比,缺氧抑制组miR-210的相对表达量显著降低(P0.05). MTT法检测细胞的生长抑制率,transwell检测其侵袭能力,western blot检测EMT相关蛋白表达,发现与常氧组相比,缺氧组胃癌细胞相对存活率显著升高,侵袭细胞数明显增加(P0.05)；而通过miR-210 inhibitor抑制miR-210的表达后,胃癌细胞相对存活率显著降低,侵袭细胞数明显减少(P0.05).Western blot结果发现与常氧组相比,缺氧组上皮标志物表达减少,间质标志物表达增加；而降低miR-210表达可逆转EMT相关蛋白的表达。结论：1、缺氧能诱导miR-210表达增加,同时增强胃癌细胞的增殖侵袭能力,促进EMT过程。2、敲低miR-210表达抑制了缺氧状态下胃癌的增殖侵袭能力,并且抑制EMT过程。第三部分 缺氧状态下胃癌细胞miR-210作用靶点的研究目的：研究缺氧状态下胃癌细胞miR-210的作用靶点。方法：通过生物信息软件预测miR-210的可能靶点,检测常氧组、缺氧组和缺氧miR-210抑制组中miR-210可能靶基因及蛋白的表达。结果：选择PicTar、TargetScan和mirbase这3个软件预测miR-210的靶基因,结合既往相关的文献,发现HOXA9、EFNA3和FGFRL1为其可能的靶基因。实时定量PCR结果显示缺氧组HOXA9的相对表达量低于常氧组,而缺氧miR-210抑制组则高于缺氧组,差异有统计学意义(P0.05)；缺氧miR-210抑制组FGFRL1的相对表达量则明显高于缺氧组(P0.05)。EFNA3的表达在三组中无明显差异。Western blot的结果表明缺氧组与常氧组相比FGFRL1的蛋白表达比值下降,差异具有统计学意义(P0.05),缺氧miR-210抑制组与缺氧组相比FGFRL1的蛋白表达比值则明显上升(P0.05)。而HOXA9和EFNA3蛋白在三个组中表达无显著性差异。结论：1、FGFRL1的表达受缺氧的影响,同时抑制胃癌细胞中miR-210可以上调FGFRL1的表达。2、FGFRL1可能是胃癌细胞缺氧状态下miR-210的靶基因,而HOXA9和EFNA3不是miR-210在胃癌细胞中的靶基因。
[Abstract]:The first chapter of expression of miR-210 in gastric carcinoma and its correlation with clinicopathological factors and prognosis. Objective: To investigate the microRNA-210 (miR-210) in gastric cancer (gastric cancer, GC) expression and its clinical significance. Methods: to detect expression of miR-210 carcinoma and corresponding 78 cases of gastric carcinoma tissues, and analyze the relationship and the clinical pathology factors and prognosis. Results: real time quantitative PCR showed that the expression of miR-210 in gastric cancer was higher than that of adjacent tissues, the comparison was statistically different (P0.05) expression and tumor size.MiR-210 (P=0.022), lymph node metastasis (P=0.018) and TNM stage (P=0.034) is closely related to the low expression of.MiR-210 patients the 5 year survival rate was 48.2%, with high expression of MiR-210 5 year survival rate was 30.4%, the difference was statistically significant (2=4.216, P=0.040). Conclusion: 1. compared with noncancerous tissues, miR-210 in gastric carcinoma The expression was significantly increased, suggesting that miR-210 may be associated with the development of gastric cancer.2.MiR-210 expression and clinical stage and metastasis, and can be used as a reliable indicator of prognosis. The second part hypoxia and the effect of miR-210 on invasion and metastasis of gastric cancer cells research objective: To observe the effect of hypoxia on gastric cancer cell proliferation, invasion and influence EMT process and possible role of miR-210 in this process. Methods: LipofectamineTM 2000 hsa-mir-210 inhibitor in transfected gastric cancer cell lines, knockdown miR-210 protein, real-time quantitative PCR detection of normoxia, hypoxia and hypoxia inhibits the expression of miR-210, miR-210 in gastric cancer cells under the condition of MTT method, Transwell assay and Western blot the changes were detected in cell proliferation, invasion and EMT related proteins. Results: compared with normoxia group, hypoxia group was significantly miR-210 Increase (P0.05); compared with the hypoxia group, the relative expression of inhibition of hypoxia group miR-210 decreased significantly (P0.05). MTT assay for the detection of cell growth inhibition rate, Transwell detection of invasion, the expression of Western blot detection of EMT related protein, compared with normoxia group, hypoxia group significantly increased the relative survival rate of gastric cancer cells. The number of invasive cells increased significantly (P0.05); the expression of inhibitor and miR-210 by inhibiting miR-210, relative survival rate was significantly lower in gastric cancer cells, invasive cells significantly reduced the number of (P0.05).Western blot results showed that compared with normoxia group, hypoxia group decreased expression of epithelial markers, mesenchymal marker expression and reduce the expression of miR-210 increased; the expression of EMT related proteins can be reversed. Conclusion: 1. Hypoxia can induce the expression of miR-210 increased, while enhancing the proliferation of gastric cancer cells invasion ability, promote the process of EMT.2, knockdown of miR-210 inhibited the expression of. The oxygen state of proliferation of gastric cancer invasion and inhibition of the EMT process. The third part under hypoxia study of gastric cancer cell miR-210 target: target miR-210 gastric cancer cells under hypoxia study. Methods: through bioinformatics software to predict possible targets of miR-210 detection, normoxia group, hypoxia group and miR-210 hypoxia miR-210 inhibition group target gene expression and protein. Results: PicTar, TargetScan and the predicted target gene of miR-210 miRBase 3 software, combined with previous related literature, found that HOXA9, EFNA3 and FGFRL1 as the target gene can be. The real-time PCR showed that the relative expression amount of HOXA9 was lower than the normal hypoxia group oxygen and hypoxia group, miR-210 inhibition group was higher than the hypoxia group, the difference was statistically significant (P0.05); the relative expression of miR-210 inhibits hypoxia group FGFRL1 was significantly higher than that of hypoxia group (P0.05.EFNA3) The expression of.Western blot showed no significant difference in the three groups showed hypoxia group and normoxia group compared FGFRL1 protein expression ratio decreased, the difference was statistically significant (P0.05), hypoxia group and hypoxia group compared miR-210 inhibited FGFRL1 protein expression ratio was significantly increased (P0.05). HOXA9 and EFNA3 protein in three the group was no significant difference. Conclusion: 1. The expression of FGFRL1 was affected by hypoxia, the expression of.2 and miR-210 in gastric cancer cells can inhibit the expression of FGFRL1 FGFRL1 may be the target gene of gastric cancer cells under hypoxia miR-210, and the target gene HOXA9 and EFNA3 are not miR-210 in gastric cancer cells.
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
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，本文编号：1705489
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