MiRNA-139-5p靶向ZEB1增强乳腺癌细胞对多西他赛的敏感性并抑制其迁移
本文选题：miRNA-139-5p 切入点：ZEB1 出处：《南京医科大学》2016年博士论文
【摘要】：目的：在世界范围内,乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤,也是女性最主要的死亡原因。MiRNA-139-5p已经被证实能够抑制乳腺癌细胞的转移,其具体的分子机制值得进一步探索,且miRNA-139-5p对乳腺癌化疗的影响仍然是研究空白。本实验的目的是研究miRNA-139-5p对乳腺癌细胞多西他赛敏感性以及乳腺癌细胞迁移的影响,并探索其背后的分子机制。方法：采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/Doc和MDA-MB-231中miRNA-139-5p和ZEB1mRNA的表达,采用蛋白质免疫印迹实验检测E盒结合锌指蛋白1(ZEB1)蛋白的表达。转染miRNA-139-5pmimic升高miRNA-139-5p,采用细胞毒性实验观察细胞对多西他赛敏感性的变化,采用迁移实验和划痕实验观察细胞迁移能力的变化。采用实时荧光定量PCR和蛋白质免疫印迹实验观察miRNA-139-5p升高或降低后,ZEB1mRNA和蛋白的变化。采用实时荧光定量PCR检测乳腺癌和癌旁正常组织中miRNA-139-5p和ZEB1 mRNA的表达,观察两者的相关性,以及与化疗疗效的相关性。提取TCGA数据库中的数据,分析miRNA-139-5p和临床病理参数以及总生存的相关性。各实验至少独立重复3次。计量数据用平均数±标准差表示,采用SPSS19.0软件分析实验结果,根据数据分布以及方差齐性选择t检验或非参数检验,以p0.05表示有统计学意义。结果：MiRNA-139-5p在MCF-7/Doc和MDA-MB-231细胞中表达较在MCF-7细胞中下降,ZEB1表达升高。升高miRNA-139-5p后,MCF-7和MCF-7/Doc细胞对多西他赛的敏感性增强,MCF-7和MDA-MB-231细胞迁移能力减弱。升高或降低MCF-7细胞中miRNA-139-5p后,ZEB1的变化相反。沉默ZEB1后,MCF-7细胞对多西他赛的敏感性增强,迁移减弱。用miRNA-139-5pinhibitor和ZEB1siRNA共转染MCF-7细胞,siZEB1可以逆转由inhibitor引起的多西他赛敏感性降低以及迁移增强。乳腺癌组织中的miRNA-139-5p、ZEB1 mRNA均较癌旁组织降低,化疗有反应和无反应的乳腺癌组织中miRNA-139-5p的表达无明显差别。对TCGA数据库中的数据分析显示miRNA-139在乳腺癌尤其是基底细胞样乳腺癌中表达降低,是基底细胞样乳腺癌的不良预后因子。结论：MiRNA-139-5p通过靶向抑制ZEBl而增强乳腺癌细胞对多西他赛的敏感性,并抑制其迁移。但是,miRNA-139-5p却是基底细胞样乳腺癌的不良预后因子。
[Abstract]:Objective: in the world, breast cancer is the most common malignant tumor in women and the leading cause of death in women. MiRNA-139-5p has been proved to inhibit the metastasis of breast cancer cells, and its specific molecular mechanism is worthy of further exploration.And the effect of miRNA-139-5p on breast cancer chemotherapy is still blank.The purpose of this study was to investigate the effect of miRNA-139-5p on the sensitivity of breast cancer cells to docetaxel and the migration of breast cancer cells and to explore the molecular mechanism behind it.Methods: the expression of miRNA-139-5p and ZEB1mRNA in breast cancer cell line MCF-7 / 7 / Doc and MDA-MB-231 was detected by real-time fluorescence quantitative PCR, and the expression of E-box binding zinc finger protein (ZEB1) was detected by Western blot.Transfection of miRNA-139-5pmimic increased miRNA-139-5 p.The cytotoxicity test was used to observe the sensitivity of cells to docetaxel, the migration test and scratch test were used to observe the change of cell migration ability.Real time fluorescence quantitative PCR and Western blot were used to observe the changes of ZEB1 mRNA and protein after the increase or decrease of miRNA-139-5p.The expression of miRNA-139-5p and ZEB1 mRNA in breast cancer and adjacent normal tissues were detected by real-time fluorescence quantitative PCR.The data from TCGA database were extracted and the correlation between miRNA-139-5p and clinicopathological parameters and total survival was analyzed.Each experiment was repeated at least 3 times independently.The measurement data are expressed as mean 卤standard deviation, and the experimental results are analyzed by SPSS19.0 software. According to the data distribution and the homogeneity of variance, t test or non-parameter test are selected.Results the expression of 1% MiRNA-139-5p in MCF-7/Doc and MDA-MB-231 cells was higher than that in MCF-7 cells.The sensitivity of MCF-7 and MCF-7/Doc cells to docetaxel increased after miRNA-139-5p. The migration ability of MCF-7 and MDA-MB-231 cells decreased.The changes of ZEB1 in MCF-7 cells were reversed after miRNA-139-5p was increased or decreased.The sensitivity of MCF-7 cells to docetaxel was enhanced and migration decreased after ZEB1 silencing.Cotransfection of MCF-7 cells with miRNA-139-5pinhibitor and ZEB1siRNA could reverse the decrease in docetaxel sensitivity induced by inhibitor and increase migration.The expression of miRNA-139-5 pAg-ZEB1 mRNA in breast cancer tissues was lower than that in adjacent tissues. There was no significant difference in the expression of miRNA-139-5p between chemotherapeutic and non-reactive breast cancer tissues.The analysis of data in TCGA database showed that the expression of miRNA-139 was decreased in breast cancer, especially in basal cell like breast cancer, which was a bad prognostic factor of basal cell like breast cancer.Conclusion: 1 MiRNA-139-5p enhances the sensitivity of breast cancer cells to docetaxel and inhibits their migration by targeting ZEBl.However, miRNA-139-5p is an adverse prognostic factor for basal cell like breast cancer.
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
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，本文编号：1710587
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