miR-589-5p下调MAP3K8抑制CD90阳性肝癌干细胞特性及其临床意义研究

发布时间：2018-04-10 14:22

  本文选题：肿瘤干细胞 + CD90　； 参考：《第三军医大学》2016年博士论文

【摘要】：研究背景肝细胞性肝癌(以下简称肝癌)对于放化疗均不敏感,手术切除后复发率高,常导致肝癌治疗的失败。肿瘤干细胞是肿瘤中一小群具有自我更新、无限增殖、多向分化及转移迁徙特性的细胞,被认为是肿瘤复发、转移及放化疗耐受的主要原因之一。针对肿瘤干细胞的靶向疗法为肝癌治疗提供了崭新思路。目前有多个分子作为表面标志物用于分离肝癌中的肿瘤干细胞,包括CD90,Ep CAM,CD133,CD24、OV-6和CD44,但不清楚哪个标志物更具有普遍性,更适合于临床应用。microRNA(miRNA)是一类非编码的小RNA,数量众多,长度通常在17-27个碱基之间。miRNA主要通过与信使RNA(m RNA)的3’-端非翻译区(3’-UTR)发生碱基互补配对,使得靶m RNA降解或蛋白质翻译受到抑制,由此实现在转录后水平对基因表达的负向调控。在人类肿瘤中发现一系列的miRNA参与了肿瘤干细胞群体的维持及干细胞特性的调控,如增殖、迁移、侵袭及放化疗耐受。但是调控CD90阳性肝癌干细胞的miRNA目前还不清楚。丝裂原活化蛋白3激酶8(MAP3K8)是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的一个成员,与多种人类肿瘤的形成和进展密切相关。MAP3K8在肿瘤中的作用有着两面性,在大多数肿瘤,例如乳腺癌、结肠癌、肾癌、子宫内膜癌、胃癌、鼻咽癌、胸腺瘤和淋巴瘤中,MAP3K8都发挥着促进肿瘤的作用。MAP3K8与NF-κB信号通路有着错综复杂的相互调节的关系,而NF-κB在很多肿瘤中都被激活,并参与了肿瘤干细胞的维持、扩增及存活,这些现象提示MAP3K8可能参与了肿瘤干细胞的调节。但是在肝癌中,尤其是在肝癌干细胞中,MAP3K8是否发挥作用以及发挥何种作用并不清楚。研究方法1通过流式细胞技术检测各肝癌干细胞表面标志物在肝癌细胞株中的表达,通过细胞成球实验研究干细胞培养环境对于CD90表达的影响。通过q RT-PCR、细胞成球、平板克隆形成、Transwell侵袭小室及裸鼠成瘤验证CD90阳性肝癌细胞的干细胞特性。2通过miRNA微阵列芯片探索与CD90阳性肝癌干细胞相关的miRNA,并用q RT-PCR验证芯片结果。其中我们选择了mi R-589-5p作为研究对象,转染mi R-589-5p mimics使其过表达,并探索mi R-589-5p对CD90阳性肝癌干细胞特性的影响。3通过计算机预测mi R-589-5p下游靶蛋白,利用荧光素酶报告实验、q RT-PCR及Western blot验证mi R-589-5p对靶蛋白MAP3K8的直接调控作用。4利用si RNA干扰MAP3K8的表达,研究MAP3K8对CD90阳性肝癌干细胞特性的影响。5通过免疫组织化学和q RT-PCR分别检测CD90和mi R-589-5p在原发性肝癌中的表达,并统计分析CD90和mi R-589-5p的表达对于肝癌患者预后的影响。研究结果1在被检测的肝癌干细胞表面标志物中,只有CD90在各个肝癌细胞株中均有阳性表达,且稳定在一个比例较低的水平,即使在细胞成球后仍是如此。CD90阳性肝癌细胞具有肝癌干细胞特性,比如表达干细胞相关基因,具有更强的自我更新、迁移、侵袭及成瘤能力。2 miRNA微阵列芯片发现,与CD90阴性细胞相比,CD90阳性肝癌细胞中有3个上调的miRNA以及6个下调的miRNA。q RT-PCR证实mi R-589-5p和mi R-33b-5p在CD90阳性肝癌细胞中下调。转染mi R-589-5p mimics可以使mi R-589-5p过表达,并抑制CD90阳性肝癌干细胞特性,包括干细胞相关基因的表达、自我更新、迁移、侵袭及成瘤能力。3荧光素酶报告基因显示mi R-589-5p可以与MAP3K8 m RNA的3’-UTR直接结合。在CD90阳性肝癌干细胞中过表达mi R-589-5p将降低MAP3K8的m RNA和蛋白水平。4转染MAP3K8 si RNA能抑制MAP3K8的表达,并抑制CD90阳性肝癌干细胞特性,包括干细胞相关基因的表达、自我更新、迁移及侵袭能力。5 CD90在原发性肝癌组织中均有表达,且表达于一小群肝癌细胞中。mi R-589-5p和CD90的表达量在肝癌组织中呈负相关。CD90高表达和mi R-589-5p低表达的肝癌患者更容易发生血管侵犯及术后复发,且无瘤生存率及总生存率较低,预后不良。结论1.CD90是理想的肝癌干细胞标志物,CD90阳性肝癌细胞表达干细胞相关基因、具有自我更新、迁移、侵袭及体内成瘤等肝癌干细胞特性。2.mi R-589-5p可抑制CD90阳性肝癌细胞的肿瘤干细胞特性,在CD90阳性肝癌干细胞中显著下调。3.mi R-589-5p通过与MAP3K8 m RNA的3’-UTR结合,下调MAP3K8的表达来抑制CD90阳性肝癌细胞的肿瘤干细胞特性。4.原发性肝癌中普遍表达CD90,其表达量与mi R-589-5p呈显著负相关。CD90高表达和mi R-589-5p低表达提示预后不良。CD90和mi R-589-5p可作为预测肝癌患者预后的有效指标。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 冷政伟;夏清华;;肝癌干细胞研究进展[J];腹部外科;2008年06期

2 宋凯;杨硕菲;吴俊华;江春平;;肝癌干细胞的研究进展[J];世界华人消化杂志;2009年36期

3 严威;吴国洋;;肝癌干细胞分离鉴定研究进展[J];肝胆外科杂志;2010年03期

4 李广权;陈伟强;;肝癌干细胞的研究现状[J];医学综述;2013年03期

5 张朵;朱海英;马凤云;胡以平;;肝癌干细胞的研究现状[J];生命的化学;2006年01期

6 陈丽;戴广海;;肝癌干细胞研究现状[J];临床肿瘤学杂志;2008年12期

7 唐飞;吕洪敏;向慧玲;;肝癌干细胞的研究现状[J];实用肝脏病杂志;2008年02期

8 张伟;陈孝平;;肝癌干细胞的研究进展[J];临床外科杂志;2008年09期

9 张华;高志红;许田英;朱建凤;文家斌;张阳;;常规化疗对肝癌干细胞的作用[J];胃肠病学和肝病学杂志;2009年06期

10 徐文;曹璐;殷正丰;;肝癌干细胞研究进展与方向[J];癌症;2009年09期

相关会议论文 前4条

1 单娟娟;钱程;;悬浮条件培养法富集肝癌干细胞[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年

2 尹川;谢渭芬;;肝癌干细胞及其分化治疗[A];第九次全国消化系统疾病学术会议专题报告论文集[C];2009年

3 殷胜勇;陈新华;胡晨;;CD133阳性肝癌干细胞在肝癌肝移植术后肿瘤复发中的作用及纳秒脉冲进行干预的初步实验研究[A];2013中国器官移植大会论文汇编[C];2013年

4 杜智;宋文芹;张世光;高英堂;朱争艳;王毅军;只丹琮;;人原发性肝癌细胞建系及其生物学特性的初步鉴定[A];天津市生物医学工程学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年

相关重要报纸文章 前1条

1 本报记者 王雪敏;肝癌干细胞及其分化治疗[N];医药经济报;2010年

相关博士学位论文 前10条

1 雷增杰;组蛋白去甲基化酶LSD1促进肿瘤细胞“干性”和侵袭转移的机制研究[D];第三军医大学;2015年

2 张克志;三氧化二砷抑制GLI1表达诱导肝癌干细胞分化延长术后生存期的实验研究[D];复旦大学;2014年

3 刘辉琦;肝癌干细胞相关功能性基因的研究[D];北京协和医学院;2015年

4 戎晓祥;CIK细胞对肝癌干细胞的杀伤作用及其相关机制研究[D];南方医科大学;2015年

5 朱平平;肝癌干细胞相关基因和长链非编码RNA调控自我更新的分子机制研究[D];中国科学技术大学;2016年

6 罗勇利;Nanog~-非肝癌干细胞维持Nanog~+肝癌干细胞自我更新作用的分子机制研究[D];第三军医大学;2016年

7 刘春刚;Sox9调控肝癌干细胞对称非对称分裂影响自我更新及肿瘤发生的研究[D];浙江大学;2016年

8 刘颜敏;超声靶向微泡介导CD133-shRNA转染对CD133~+肝癌干细胞生物学特性及上皮间质转化的影响[D];重庆医科大学;2016年

9 朱新锋;全反式维甲酸诱导分化肝癌干细胞作用研究[D];昆明医科大学;2016年

10 王雪;长链非编码RNA对肝癌干细胞的调控作用及分子机制[D];第二军医大学;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 马俊明;人肝癌组织中肝癌干细胞的分离培养与鉴定[D];宁夏医科大学;2015年

2 巩志荣;靶向肝癌细胞和肝癌干细胞的共载盐霉素钠和阿霉素纳米脂质体的体内外研究[D];第二军医大学;2015年

3 王璐;抑瘤素M与盐霉素联用对肝癌干细胞作用的研究[D];吉林大学;2016年

4 陆世东;CD90阳性细胞筛选及PI3K/AKT通路对其干细胞样特性影响的初步研究[D];广西医科大学;2016年

5 杨帅;基于耐药和单细胞全克隆构建肝癌干细胞体外富集模式的实验研究[D];广西医科大学;2016年

6 何永燕;抗人肝癌干细胞功能性单抗的研究[D];广西医科大学;2016年

7 杨婧;肝癌干细胞靶向治疗的研究[D];北京协和医学院;2016年

8 何欢;纳米羟基磷灰石负载p53基因及阿霉素对肝癌干细胞抑制效果研究[D];浙江理工大学;2016年

9 赖佛宝;脂多糖对肝癌干细胞干性维持的作用及其机制研究[D];福建医科大学;2016年

10 戴雪辰;乙型肝炎病毒preS1基因对肝癌干细胞的发生和发展的促进作用研究[D];武汉大学;2017年

，

本文编号：1731571