miRNA196a调控食管鳞癌Annexin A1蛋白表达对转移和预后的影响及其机制研究

发布时间：2018-04-13 14:33

  本文选题：膜联蛋白A1 + 食管鳞癌　； 参考：《苏州大学》2015年博士论文

【摘要】：目的：检测膜联蛋白Annexin A1(ANXA1)蛋白在食管鳞癌患者血清和癌组织中的表达,研究其表达水平与食管癌放化疗敏感性、转移和预后的关系。检测放化疗前后miRNA196a、ANXA1表达的变化,研究在体内miRNA1 96a对ANXA1的表达调控作用。通过细胞培养转染ANXA1质粒以及miRNA196a后检测细胞增殖及迁移、侵袭能力,探讨在体外miRNA196a调控ANXA1表达并影响食管癌侵袭与转移的机制。方法：1.组织芯片试验：收集食管鳞癌手术后的病理标本,从蜡块中获得组织芯片,利用免疫组化染色测定食管鳞癌组织标本中ANXA1的表达水平,并与患者的临床病理参数和随访资料进行相关性分析。2.临床试验：接受放化疗的非手术食管鳞癌46例患者,采集其治疗前后的外周静脉血清,测定ANXA1的蛋白水平和miRNA196a的表达水平。将血清ANXA1表达情况与患者的临床病理参数和随访资料进行相关性分析,探讨血清ANXA1与食管癌转移和预后的关系；并研究体内miRNA196a对ANXA1表达的调控作用。3.细胞培养试验：体外培养食管鳞癌细胞株(Eca109),构建ANXA1表达质粒(pCMV5-myc-ANXA1),将ANXA1质粒和miRNA196a-mimic/inhibitor转染进Eca109细胞,检测在体外miRNA196a对ANXA1表达的影响,利用MTT实验、Transwell实验分别检测细胞存活率以及细胞迁移、侵袭能力,观察miRNA196a调控ANXA1表达对细胞增殖和侵袭转移的影响。并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测食管癌细胞中转移相关蛋白Snail和E-cadherin的表达。结果：1.免疫组化染色结果表明食管鳞癌组织中的ANXA1表达降低,胞浆和胞核中的表达水平均显著低于癌旁鳞状上皮组织。食管鳞癌组织中胞核ANXA1表达水平与大体分型显著相关,而与其他临床病理参数无关。2.食管鳞癌细胞核ANXA1表达与预后相关,胞核ANXA1低表达者比高表达者预后好。3.食管鳞癌患者血清中的ANXA1表达水平低于健康人群的血清水平,但经过放化疗后血清中ANXA1表达水平明显上调。4.食管鳞癌患者治疗前血清ANXA1基线水平与放化疗敏感性和预后无相关。治疗前血清ANXA1水平高的食管鳞癌患者1年PFS较差,但差异无统计学意义；而治疗后ANXA1表达上调幅度与1年PFS相关,上调越显著者复发和转移几率越高,差异有统计学意义。5.食管鳞癌患者血清中的miRNA196a水平在放化疗后表达显著下调,miRNA196a与ANXA1的表达在治疗前后呈相反的变化趋势。6. pCMV5-ANXA1表达质粒构建成功,将ANXA1转染进入食管癌细胞中后能够表达。转染ANXA1后食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空载组的食管癌细胞。7.转染miRNA196a-mimic后食管鳞癌细胞miRNA196a表达上调而ANXA1表达下调,转染miRNA 196a-inhibitor后ANXA1表达上调。转染miRNA196a-mimic后食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭生长能力显著降低,共转染ANXA1可以逆转这种抑制作用。8.转染ANXA1可促进食管鳞癌细胞中Snail表达而抑制E-cadherin表达,而转染miRNA196a-mimic的结果恰恰相反。结论：1.相对于健康人群血清或是癌旁正常上皮,食管鳞癌患者血清和食管鳞癌组织中的ANXA1表达均降低。但是血清ANXA1表达在放化疗后显著上调。2.食管鳞癌细胞核ANXA1表达水平与预后相关,胞核ANXA1表达越低则预后越好。食管鳞癌患者治疗后血清ANXA1上调程度与预后相关,上调越明显者预后越差。3.在食管鳞癌患者体内ANXA1表达受到miRNA196a负向调控，，ANXA1可能是miRNA196a的靶基因。4.体外实验显示ANXA1能促进食管鳞癌细胞的增殖,并通过Snail、E-cadherin途径促进侵袭转移,这是ANXA1高表达患者易于转移和预后差的分子基础。5.体外实验证实ANXA1是miRNA196a的靶基因,miRNA196a可抑制食管鳞癌中ANXA1的表达并抑制细胞增殖；过表达miRNA196a能通过促进E-cadherin进而抑制食管癌侵袭和转移。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of annexin A1 ( ANXA1 ) protein in serum and cancer tissues of esophageal squamous cell carcinoma .
The expression level of ANXA1 in esophageal squamous cell carcinoma was significantly lower than that in healthy population . The expression level of ANXA1 in esophageal squamous cell carcinoma was significantly lower than that in healthy population .
Conclusion : The expression of ANXA1 and ANXA1 in esophageal squamous cell carcinoma were significantly downregulated after chemotherapy .
overexpression of miRNA196a can further inhibit invasion and metastasis of esophageal cancer by promoting E - cadherin .

【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1

【共引文献】

相关期刊论文 前10条

1 年峰;彭开桂;;乳腺癌转移抑制基因在肿瘤中的研究进展[J];蚌埠医学院学报;2010年03期

2 任国胜;;乳腺癌转移相关基因的研究现状[J];重庆医学;2005年12期

3 杨小琼;张幸平;;BRMS1基因在乳腺癌中的研究进展[J];重庆医学;2007年21期

4 薛振伟;周小林;崔梅萍;;蛋白质组学及其在肺癌研究中的应用[J];辐射防护通讯;2011年05期

5 葛慧娟;杨晓群;余宏宇;何金;刘惠敏;;结直肠癌及其淋巴结转移灶内AnnexinⅠ和AnnexinⅡ的表达及意义[J];第二军医大学学报;2009年03期

6 杨晓群;葛慧娟;汪佳祺;余宏宇;何金;刘惠敏;蔡在龙;;pcDNA3.1-Annexin A1真核表达载体对结直肠癌细胞迁移、侵袭的影响[J];第二军医大学学报;2010年03期

7 肖游章;庄暨军;张海娥;;BRMS1在乳腺癌中的研究进展[J];第四军医大学学报;2009年24期

8 廖维婷;陈文勇;;鼻咽癌相关基因的研究进展[J];中医耳鼻喉科学研究;2011年02期

9 Mick D. EDMONDS;Douglas R. HURST;Danny R. WELCH;王伟强;李书军;;转移抑制与metastamiR调节的联系[J];中国肺癌杂志;2010年02期

10 曲利娟;梁莉;丁彦青;;膜联蛋白-1在大肠癌组织中的表达及意义[J];福州总医院学报;2008年S1期

相关会议论文 前3条

1 唐鲁兵;孙靖中;余之刚;高德宗;李亮;张强;李玉阳;;转染BRMS1基因对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外侵袭力的影响[A];山东抗癌协会普外肿瘤专业委员会第三次学术会议论文汇编[C];2006年

2 林红;闵燕飞;;ANXA_1在人肾透明细胞癌组织中表达的临床意义[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

3 闵燕飞;林红;;膜联蛋白A_1与肿瘤的关系[A];江西省中医、中西医结合肿瘤学术交流会论文集[C];2012年

相关博士学位论文 前10条

1 朱巍;乳腺癌转移抑制基因BRMSI功能的研究[D];苏州大学;2010年

2 吴成利;ALDH1A1在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学的作用[D];第二军医大学;2011年

3 辛虹;膜联蛋白A家族与子痫前期[D];河北医科大学;2011年

4 唐建华;三维肝癌类组织体模型建立及肺侵袭关联蛋白筛查[D];复旦大学;2010年

5 张志敏;APE1作用相关蛋白及其在肿瘤放射治疗中的作用研究[D];第三军医大学;2011年

6 梁博伟;沉默膜联蛋白A1对兔骨髓间充质干细胞和成骨细胞生物特性的影响[D];广西医科大学;2012年

7 吴炜新;肺癌转移相关蛋白的蛋白质组学分析及负性免疫分选法纯化转移灶中肿瘤细胞的探索[D];吉林大学;2005年

8 于观贞;利用组织芯片和基因芯片研究胃及大肠癌转移机制[D];第二军医大学;2006年

9 蔺会云;一条新的转移相关基因mag-1的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年

10 唐鲁兵;转移抑制基因BRMS1与乳腺癌转移关系的研究[D];山东大学;2006年

相关硕士学位论文 前10条

1 魏立伟;BRMS1、KISS1和CD82在胃癌中的表达及意义[D];泰山医学院;2007年

2 李萍;SPARCL1在胃癌中的表达及其对预后的影响[D];第二军医大学;2011年

3 廖维婷;Cyr61在鼻咽癌中的表达及与不同中医证型相关性的研究[D];广州中医药大学;2011年

4 胡维博;小细胞肺癌血浆差异蛋白的双向电泳—质谱分析[D];河北医科大学;2011年

5 陈苏琼;LCM结合定量蛋白质组学技术筛选胃癌组织差异表达蛋白质[D];南华大学;2011年

6 练士贤;人源性长寿保障基因LASS2在乳腺癌组织和细胞中的表达及意义[D];复旦大学;2010年

7 赵卫东;转染BRMS1基因对人类胰腺癌细胞在裸鼠体内肿瘤转移能力影响的研究[D];泰山医学院;2011年

8 朱燕霞;Annexin A1和高危型HPV在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达及意义[D];泰山医学院;2011年

9 李晓瑜;肿瘤转移抑制基因BRMS1在喉癌中的表达及其意义[D];中国医科大学;2006年

10 高喜红;膜联蛋白-1、P16及CDK4蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床病理意义[D];兰州大学;2006年

本文编号：1744964