SNAI2—E-cadherin轴在LRIG1调节人脑胶质瘤细胞侵袭和转移中的作用研究
本文选题：胶质瘤 + LRIG1 ； 参考：《武汉大学》2016年博士论文
【摘要】：目的：探讨LRIG1对人脑胶质瘤细胞侵袭及转移能力的影响及其可能的分子机制。探讨SNAI2|—E-cadherin轴在这一过程中所发挥的作用。方法：使用质粒转染LRIG1基因的方法使人脑胶质瘤细胞系U251细胞中高表达LRIG1,采用G418筛选出阳性单克隆细胞株并进行扩增,RT-PCR及Western Blot验证LRIG1在mRNA及蛋白水平高表达。应用siRNA使人脑胶质瘤细胞系U251细胞中低表达LRIG1,RT-PCR及Western Blot验证LRIG1在mRNA及蛋白水平低表达。Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化,Transwell转移实验及划痕愈合实验检测细胞转移能力的变化。RT-PCR及Western Blot检测LRIG1表达水平改变时EMT相关标记分子SNAI2及其下游分子E-cadherin的变化。收集人脑胶质母细胞瘤及人正常脑组织标本,采用Western Blot检测各例标本中LRIG1与SNAI2和E-cadherin的蛋白表达。最后使用SNAI2的小分子抑制剂PCPA处理LRIG1低表达的U251细胞,观察SNAI2功能被抑制后低表达LRIG1对细胞侵袭及转移能力的影响及SNAI2—E-cadherin轴的变化。结果：运用质粒转染的方法成功构建高表达LRIG1的人脑胶质瘤U251细胞株。LRIG1高表达可导致U251细胞侵袭及转移能力明显下降。同时LRIG1高表达会下调细胞中SNAI2的表达,导致细胞中E-cadherin表达量明显上升。运用特异性沉默LRIG1的siRNA成功构建低表达LRIG1的人脑胶质瘤U251细胞株。LRIG1低表达可导致U251细胞侵袭及转移能力明显上升。同时LRIG1低表达会上调细胞中SNAI2的表达,导致细胞中E-cadherin表达量明显下降。与正常人脑组织相比,人脑胶质母细胞瘤组织中LRIG1蛋白水平较低,SNAI2蛋白水平明显上调而E-cadherin蛋白水平明显下调。进一步实验表明,使用PCPA处理LRIG1低表达的U251细胞阻断SNAI2的功能,可逆转LRIG1低表达对U251细胞侵袭和转移能力的促进作用及对E-caherin表达的调节作用。结论：LRIG1可以抑制人脑胶质瘤U251细胞侵袭及转移,这一作用与LRIG1抑制SNAI2—E-cadherin轴有关。人脑胶质母细胞瘤LRIG1蛋白水平较低,SNAI2蛋白水平较高,E-cadherin蛋白水平较低。人脑胶质母细胞瘤中LRIG1可通过SNAI2—E-cadherin轴调节细胞侵袭与转移能力,但其详细的分子机制尚有待进一步研究。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of LRIG1 on invasion and metastasis of human glioma cells and its possible molecular mechanism.The role of SNAI2-E-cadherin axis in this process is discussed.Methods: the expression of LRIG1 in human glioma cell line U251 was induced by plasmid transfection of LRIG1 gene. The positive monoclonal cell line was screened by G418, and the overexpression of LRIG1 in mRNA and protein levels was verified by RT-PCR and Western Blot.Using siRNA to induce low expression of LRIG1T in human glioma cell line U251 by RT-PCR and Western Blot to verify the change of cell invasion ability of LRIG1 in mRNA and protein low expression .Transwell invasion assay; Transwell metastasis test; scratch healing assay to detect cell metastasisAbility change. RT-PCR and Western Blot were used to detect the changes of EMT related marker SNAI2 and its downstream E-cadherin.Western Blot was used to detect the expression of LRIG1, SNAI2 and E-cadherin in human glioblastoma and normal brain tissue.Finally, U251 cells with low expression of LRIG1 were treated with PCPA, a small molecular inhibitor of SNAI2. The effect of low expression of LRIG1 on the invasion and metastasis of U251 cells and the changes of SNAI2-E-cadherin axis were observed after SNAI2 function was inhibited.Results: the overexpression of human glioma cell line. LRIG1 was successfully constructed by plasmid transfection. The ability of invasion and metastasis of U251 cells decreased significantly.At the same time, the high expression of LRIG1 can down-regulate the expression of SNAI2, leading to a significant increase in the expression of E-cadherin.The low expression of human glioma cell line. LRIG1, which was successfully constructed by using siRNA with specific silencing of LRIG1, could significantly increase the ability of invasion and metastasis of U251 cells.At the same time, low expression of LRIG1 upregulated the expression of SNAI2, which resulted in the decrease of E-cadherin expression.Compared with normal human brain tissue, the level of LRIG1 protein in glioblastoma tissue was lower than that in normal human brain tissue. The level of SNAI2 protein was up-regulated and the level of E-cadherin protein was down-regulated.Further experiments showed that PCPA treatment of U251 cells with low expression of LRIG1 could reverse the effect of LRIG1 low expression on the invasion and metastasis of U251 cells and the regulation of E-caherin expression by blocking the function of SNAI2.Conclusion: LRIG1 can inhibit the invasion and metastasis of human glioma U251 cells, which is related to the inhibition of SNAI2-E-cadherin axis by LRIG1.The level of LRIG1 protein in human glioblastoma was lower and SNAI2 protein level was higher than that of E-cadherin protein.LRIG1 can regulate the invasion and metastasis of human glioblastoma through the SNAI2-E-cadherin axis, but the detailed molecular mechanism remains to be further studied.
【学位授予单位】：武汉大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R739.41
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，本文编号：1762409
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