姜黄素抑制MT1-MMP表达对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响及淋巴管生成作用的研究

发布时间：2018-04-18 00:26

本文选题：姜黄素 + 乳腺癌　；参考：《南方医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：背景和目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,其发病率约占女性所有恶性肿瘤的30%,致死率居女性恶性肿瘤第二位。姜黄素是一种新型的抗肿瘤药物,近年来研究发现它对乳腺癌等许多恶性肿瘤均有抑制作用。有研究表明,膜型基质金属蛋白酶-1(membrane type-1 matrix metalloproteinase,MT1-MMP)与乳腺癌腋窝淋巴结转移呈正相关,而姜黄素与MT1-MMP的关系鲜有报道。因此,本研究选择MCF-7细胞株构建过表达MT1-MMP的乳腺癌细胞模型,研究姜黄素对乳腺癌MCF-7细胞MT1-MMP表达及淋巴管生成作用的影响,为其应用于乳腺癌的治疗提供理论依据。方法1.淋巴内皮细胞收集和培养收集常规包皮环切术的包皮组织,分离消化后在内皮细胞培养基(EBM)培养,用Dil-ac-LDL标记淋巴内皮细胞,加入磁珠包被人源性LYVE-1抗体和免疫磁珠,利用磁珠收集器进行收集,用DNA酶消化后使淋巴内皮细胞与磁珠分离,淋巴内皮细胞培养于基质胶包被的培养皿的内皮培基中,放入C02培养箱培养。2.表达MT1-MMP的MCF-7细胞株的建立将MT1-MMP基因克隆至真核表达质粒pcDNA3.1,经测序鉴定后,用LipofectamineTM2000脂质体转染入乳腺癌细胞MCF-7,转染2天后,改用含G418的培养基筛选出能够稳定表达MT1-MMP的MCF-7细胞。试验分以下三个组:未转染组、空白质粒组、转染组。即①MCF-7对照组;②MCF-7+pcDNA3.1空白质粒组;③MCF-7/MT1-MMP转染组,试验时加入不同浓度姜黄素处理。3.Western Blot检测试验组和对照组乳腺癌MCF-7细胞中MT1-MMP蛋白的水平;4.分别用CCK8和Transwell测定不同浓度姜黄素对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭能力的影响;5.乳腺癌MCF-7细胞株和淋巴内皮细胞联合三维培养将淋巴内皮细胞培养于基质胶(Matrigel)包被的培养皿,待细胞生长至3/4融合后,覆盖一层M199培养基配制的无细胞Matrigel;胶原聚合后,在其上覆盖一层乳腺癌细胞株Matrigel。最表面再覆盖一层内皮细胞培养基。在三维培养过程中,待细胞生长至对数生长期加入姜黄素处理。统计学处理统计学处理用SPSS 21.0软件完成,计量资料以χ±s表示,多组数据参数间比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用两样本SNK检验分析。P0.05为差异有统计学意义。结果1.MT1-MMP蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达Western Blot实验结果显示,在未转染组及空白质粒组未见明显蛋白表达条带,而在转染组均出现MT1-MMP蛋白表达条带,加入姜黄素后蛋白表达条带变低。2.姜黄素抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭作用CCK-8法和Transwell法实验结果显示:与未转染组及空白质粒组比较,转染组的细胞增值的能力增加且细胞侵袭数目增加,即表达MT1-MMP蛋白的MCF-7细胞增殖和侵袭能力明显增强,而在经姜黄素处理后其细胞增值能力降低且侵袭数目减少,表明其增殖和侵袭能力受到抑制,且这种抑制作用呈剂量依赖方式。3.姜黄素抑制乳腺癌MCF-7细胞诱导的淋巴内皮细胞增生与淋巴管生成作用荧光倒置显微镜观察三维培养中各组淋巴内皮细胞在基质中生长情况结果显示:各组乳腺癌细胞都能诱导淋巴内皮细胞增生并形成淋巴管状结构,并且转染了 MT1-MMP的诱导能力更强,而经姜黄素处理后,各组诱导能力均减弱。结论1.过表达MT1-MMP的乳腺癌MCF-7细胞增殖侵袭能力增加,而姜黄素可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖侵袭能力,机制可能与抑制MT1-MMP有关。2.姜黄素可以抑制乳腺癌MCF-7细胞诱导的淋巴内皮细胞增生并形成淋巴管状结构的作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : Breast cancer is the most common malignant tumor in women . Its incidence accounts for 30 % of all malignant tumors of breast cancer . The effect of curcumin on the proliferation and invasion ability of breast cancer MCF - 7 cells is studied . The results showed that the proliferation and invasion ability of breast cancer MCF - 7 cells transfected with curcumin inhibited the proliferation and invasion ability of breast cancer MCF - 7 cells .

【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

【参考文献】