配对盒基因2（PAX2）对食管癌细胞生物学功能的影响及机制研究

发布时间：2018-04-19 05:30

  本文选题：食管鳞状细胞癌(ESCC) + PAX2　； 参考：《苏州大学》2015年博士论文

【摘要】：第一部分:食管鳞癌组织中PAX2因子的表达及其临床意义目的 研究配对基因盒2(PAX2)在食管鳞癌(ESCC)组织、癌旁组织及正常食管上皮组织中的表达。方法 通过免疫组织化学荧光染色方法检测15例正常食管组织、52例食管鳞癌癌旁组织和120例食管鳞癌组织中PAX2的蛋白表达水平,并观察其与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤分化程度、淋巴结转移、TNM分期及淋巴管浸润的关系。结果 在人食管鳞癌组织中PAX2蛋白表达水平显著高于对应癌旁组织及正常食管组织(P=0.003和P=0.002)。PAX2蛋白表达水平与TNM分期相关(P=0.001),PAX2表达水平在37例TNM III和IV期患者中明显高于67例I和II期患者,差异有统计学意义(1.353±0.088和1.933±0.133,P0.0001);同样,PAX2的表达与淋巴结转移(P=0.019)和淋巴管浸润(P=0.005)相关,差异有统计学意义。而PAX2的表达与患者年龄、性别、生物学分级无明显相关性。结论 PAX2在食管鳞癌组织中的表达明显高于对应癌旁组织及正常食管组织,且与TNM分期、淋巴结或转移及淋巴管浸润具有显著相关性。第二部分:PAX2在食管癌中的生物学功能研究目的 研究配对基因盒2(PAX2)在食管鳞癌细胞株TE-1和Eca-109细胞中的生物学功能。方法 构建PAX2过表达载体并验证上述载体和靶向PAX2的si RNA。通过MTT与克隆形成实验检测PAX2对食管癌细胞生长增殖的影响;通过Transwell小室模型检测PAX2对食管癌细胞侵袭能力的影响;通过克隆形成实验检测PAX2对放射敏感性的影响;通过Western blot检测相关蛋白MMP-2、MMP-9的表达。结果 食管癌TE-1和Eca-109细胞转染PAX2过表达载体后,细胞中PAX2蛋白水平明显提高;细胞转染靶向PAX2的si RNA后,PAX2的水平显著低于对照组。细胞存活实验表明:PAX2过表达会抑制细胞的生长及克隆形成;而敲低PAX2的表达则能加速细胞的生长与克隆形成。Transwell实验表明,PAX2过表达促进食管癌细胞的侵袭,敲低PAX2水平则抑制细胞的侵袭。PAX2过表达能诱导MMP2和MMP9的表达水平。抑制PAX2的表达可提高食管癌细胞的放射敏感性。结论 PAX2具有抑制食管癌增殖、促进食管癌侵袭及放射抗拒性的功能。第三部分:PAX2在食管癌中的转录调控机制研究目的 研究配对基因盒2(PAX2)在食管癌细胞株中的调控网络及下游靶基因,全面揭示PAX2的调控网络。方法 TE-1细胞过表达PAX2后采用表达谱芯片检测与转染对照载体的细胞m RNA表达谱的变化。克隆不同长度的白介素5(IL-5)基因的启动子到p GL3-Basic报告基因载体上。采用荧光素酶实验检测PAX2对IL-5启动子转录活性的影响。采用RT-PCR检测PAX2对内源性IL-5的转录激活作用。采用染色质免疫共沉淀(Ch IP)检测PAX2与IL-5启动子DNA的直接结合。在组织样品中检测PAX2与IL-5 m RNA的相关性。结果 食管癌TE-1细胞转染PAX2过表达载体后有数百个基因的表达发生明显变化(变化倍数大于等于2倍)。生物信息学表明,上调变化倍数较大IL-5基因的启动子上游-110到-1100bp处存在两个PAX2结合位点,提示PAX2可能直接调控IL-5的表达。荧光素酶报告基因实验表明IL-5启动子缺失PAX2的结合位点后荧光素酶活性显著下降;PAX2过表达能提高IL-5报告基因的活性。Ch IP实验表明PAX2蛋白与IL-5启动子存在直接结合。在食管鳞癌组织样品中PAX2和IL-5的表达显著相关。结论 PAX2能直接或间接调控食管癌细胞中多个下游基因;PAX2可通过调控IL-5促进食管癌侵袭。
[Abstract]:The expression of PAX2 in esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC ) was significantly higher than that in normal esophageal tissues ( P = 0.003 and P = 0.002 ) . The expression of PAX2 and IL - 5 promoter was detected by RT - PCR . The expression of PAX2 and IL - 5 promoter was detected by RT - PCR . Results showed that PAX2 could regulate the expression of IL - 5 directly or indirectly . Conclusion PAX2 could regulate the expression of IL - 5 directly or indirectly .

【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1

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本文编号：1771803