HER2靶向抗体抗高表达HER2肿瘤细胞生长与转移的作用与机制研究

发布时间：2018-04-19 09:39

本文选题：表皮生长因子受体2 + 胃癌　；参考：《安徽医科大学》2015年硕士论文

【摘要】：背景和目的HER2/ErbB2/P 185属于人类表皮生长因子受体家族,对细胞的增殖、分化、迁移和凋亡等起着重要的调控作用,在胃癌及乳腺癌等肿瘤中均存在过表达,目前,HER2已成为肿瘤靶向药物研究的焦点,其靶向药物曲妥珠单抗(Trastuzumab)和帕妥珠单抗(Pertuzumab)已广泛应用于临床,但仍存在药物耐受和临床有效率低等问题。因此,研制和开发新的HER2肿瘤靶向药物并优化肿瘤治疗方案成为亟需解决的问题。本课题组前期开发了一株新型抗HER2人鼠嵌合抗体chA21,对卵巢癌细胞SKOV-3和人乳腺癌细胞BT-474裸鼠皮下移植瘤具有良好的抗肿瘤活性。本研究拟在新建立的人胃癌移植瘤模型及高表达HER2的自发转移性乳腺癌小鼠移植瘤模型中探索抗HER2靶向药物的抗肿瘤活性及其机制,并比较该抗体与Trastuzumab作用的异同点。材料与方法(1)建立荷人胃癌裸鼠移植瘤模型,使用抗HER2抗体进行治疗并测定肿瘤生长速率,评价抗HER2抗体的肿瘤抑制率(用T/C值表示,即给药组相对肿瘤体积/PBS对照组相对肿瘤体积),并利用免疫组化及免疫印迹的方法检测抗体处理后肿瘤细胞中HER2信号通路的变化情况。(2)将重组HER2全长基因转染至携带荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞4T1-Luc,利用G418加压筛选、免疫印迹方法及流式细胞术等方法获得稳定表达HER2蛋白的4T1-Luc细胞的表达,并建立裸鼠和BALB/c小鼠皮下移植瘤模型,测定肿瘤生长速率和抑制率,并采用小动物活体成像仪监测小鼠体内肿瘤的转移情况。结果(1)实验终点时,chA21、Trastuzumab和联用组各组肿瘤体积T/C值分别为62%、39%和7.0%；肿瘤体积抑制率分别为38.88%、60.14%和92.73%；瘤重抑制率分别为39.58%、59.46%和91.89%。与PBS对照组相比,chA21组小鼠移植瘤中HER2的蛋白水平以及ERK、Akt信号通路的活性均有明显下降,而Trastuzumab组均没有明显变化。HE染色及免疫组化(IHC)结果显示,chA21给药组肿瘤组织中的HER2染色水平明显降低；微血管数量明显减少,而凋亡细胞明显增多；Trastuzumab给药组无显著变化。(2)经过G418筛选得到多个稳转细胞株克隆4T1-Luc/HER2,经免疫印迹和流式细胞术结果证实,均存在HER2高表达。这些细胞克隆均具有良好的成瘤特性,接种1周之后即可见肿瘤呈稳定生长趋势,2-3周后,即可以观察到肿瘤转移至小鼠面部、肺部、腹股沟等部位。在BALB/c小鼠中,chA21和Trastuzumab抗体联合用药组的抑瘤率高达43.3%,与对照组相比,差异具有显著性(P0.05),明显优于抗体单用组的抑瘤率(chA21组11.1%,Trastuzumab组23%)。与此同时,抗体联合用药组小鼠肺部的转移灶荧光强度和数目与PBS对照组相比,也显著降低。结论(1)在NCI-N87胃癌移植瘤模型中,chA21单用抗肿瘤效果稍弱于Trastuzumab,但与Trastuzumab联用具有协同抗肿瘤活性。同时,chA21具有显著下调肿瘤细胞HER2受体表达的特点,而Trastuzumab该作用不明显,提示chA21的抗肿瘤作用机理与Trastuzumab有所不同。因此,我们的研究结果初步显示了新型抗HER2抗体chA21用于临床治疗HER2阳性肿瘤的良好潜力。(2)成功构建高表达HER2的4T1-Luc小鼠乳腺癌细胞系,并且建立具有自发离转移特性的乳腺癌小鼠模型。初步研究结果表明,抗HER2靶向抗体药物Trastuzumab与chA21联用具有较好的抑制肿瘤生长和转移的作用。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE : HER2 / erbB2 / P 185 belongs to human epidermal growth factor receptor family , plays an important role in the proliferation , differentiation , migration and apoptosis of human breast cancer cells .
The tumor volume inhibition rates were 38.88 % , 60.14 % and 92.73 % , respectively .
The tumor weight inhibition rate was 39.58 % , 59.46 % and 91.89 % , respectively . Compared with the PBS control group , the protein level of HER2 and ERK signal pathway in the ch21 group were significantly lower than those in the control group .
There was a significant decrease in the number of microvessels , while the number of apoptotic cells increased significantly .
In BALB / c mice , the rate of tumor inhibition was 43 . 3 % , which was significantly higher than that of control group ( P 0 . 05 ) . Conclusion ( 1 ) In the model of NCI - N87 gastric cancer , the anti - tumor effect is slightly weaker than that in the control group .

【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36

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