ATO通过下调CD44对K562细胞增殖的影响及其机制研究

发布时间：2018-04-19 12:18

本文选题：白血病 + ATO　；参考：《河北医科大学》2015年硕士论文

【摘要】：目的:本研究以慢性髓细胞白血病细胞株K562细胞为实验对象,观察三氧化二砷(ATO)作用于K562细胞前后CD44、β-catenin及Cyclin D1的表达情况,旨在从分子水平研究ATO抑制K562细胞增殖的机制,探索慢性髓细胞白血病治疗的新靶点。方法:体外培养人CML细胞株K562细胞,设空白组(不加细胞和药物的培养基)、对照组(只加细胞不加药物的细胞液)、实验组(1、2、2.5、5、10μmol/L ATO)。实验组分别加入不同浓度的ATO,培养24h、48h、72h收集细胞。通过光学显微镜观察细胞形态。MTT法检测细胞增殖状况。流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测K562细胞表面分子CD44表达情况及K562细胞周期的变化。Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析K562细胞Cyclin D1和β-catenin基因的表达改变。结果:1 ATO对K562细胞增殖的影响:MTT结果显示,5个剂量组处理K562细胞24-72h,绘制生长曲线显示,2μmol/LATO处理的细胞即出现显著的细胞增殖抑制效应,且抑制率呈时间和剂量依赖性。统计学分析显示,同一浓度各个时间点之间比较,除1μmol/L组各时间点之间无统计学差异(P0.05)外,其他剂量组时间点间的差异有统计学意义(P0.05),且抑制率均随时间的延长而增加;同一时间点各剂量组之间比较,24h的1、2、2.5μmol/L组之间无统计学差异(P0.05),其他剂量组之间有统计学差异(P0.05),48h与72h各剂量组之间均有统计学差异(P=0.016),且抑制率随浓度的增加而增加。2 ATO对K562细胞表面CD44分子表达的影响:对照组细胞生长24h、48h、72h后CD44的表达率分别为(83.47±1.28)%、(82.63±0.62)%、(82.32±0.86)%;不同药物浓度ATO作用于K562细胞24、48、72h后,CD44表达的阳性率见Table 2。统计学分析显示:同一浓度各时间点之间的比较,1μmol/L组各时间点之间无统计学差异(P0.05),其他各剂量组随时间延长,CD44表达逐渐降低,各个时间点间差异有统计学意义(P0.05);同一时间点,各剂量组间比较,除1、2μmol/L组在24h无统计学差异(P0.05)外,其余各组CD44表达的阳性率随药物浓度的增加而逐渐降低,差异有统计学意义(P=0.003)。3 ATO对K562细胞凋亡的影响:对照组与1、2、2.5、5、10μmol/LATO组作用48h后,细胞凋亡率分别为(2.09±1.42)%、(2.13±1.57)%、(2.41±1.48)%、(5.61±2.03)%、(11.84±2.69)%、(30.98±4.16)%;与对照组相比,1、2μmol/L ATO组差异无统计学意义(P0.05);2.5、5、10μmol/L ATO作用于K562细胞后凋亡率较对照组明显增加,差异有统计学意义(P0.05),且在一定范围内ATO以浓度依赖方式促进K562细胞凋亡,凋亡率随药物浓度增加而增加。4 ATO对K562细胞周期分布的影响:流式细胞术检测细胞周期分布的结果显示,对照组与1、2、2.5、5、10μmol/L ATO组作用48h后G0/G1期、S期、G2/M期的细胞比例(见Table 4)。不同浓度ATO作用48h后,K562细胞停滞在G0/G1期的细胞比例随药物浓度的增加逐渐增加,S期、G2/M期细胞比例逐渐减少,差异有统计学意义(P0.05)。5 ATO对K562细胞β-catenin表达水平的影响:RT-PCR检测结果显示,以对照组的RQ值为1,不同浓度ATO作用于K562细胞48h后β-catenin的RQ值(见Table 5);统计学分析显示,不同浓度ATO对K562细胞β-catenin表达水平的影响存在明显差异(P0.05),且随着药物浓度的增加β-catenin的表达水平呈下降趋势。经绘制散点图并进行直线相关分析得出:同一时间点,随着药物浓度的变化,CD44和β-catenin的变化趋势呈正相关,做两因素的相关分析得出,药物作用48h时,两者的相关系数为r=0.973(P0.001),有统计学意义。6 ATO对K562细胞Cyclin D1表达水平的影响:RT-PCR检测结果显示,以对照组的RQ值为1,不同浓度ATO作用于K562细胞48h后Cylin D1的RQ值(见Table 5);统计学分析显示,不同浓度ATO对K562细胞Cyclin D1表达水平的影响存在明显差异(P0.05),且随着药物浓度的增加Cylin D1的表达水平呈下降趋势。结论:1在一定浓度范围内,ATO处理的K562细胞出现明显的细胞增殖抑制效应,这一效应表现为剂量-效应和时间-效应关系,表明一定范围内ATO以浓度和时间依赖方式抑制K562细胞增殖。2 ATO能够降低K562细胞表面分子CD44的表达,且随着药物浓度的增加及作用时间的延长CD44表达明显下降。3 ATO下调CD44使K562细胞停滞在G0/G1期,这可能是K562细胞生长抑制的原因。4 ATO下调CD44使K562细胞Cyclin D1基因表达水平明显下降,这可能是使K562细胞阻滞于G0/G1期的分子机制。5 CD44和β-catenin表达水平之间存在正相关,CD44表达下降能够引起β-catenin的表达下降,抑制Wnt/β-catenin信号通路激活,从而抑制K562细胞的增殖。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of CD44 , 尾 - catenin and Cyclin D1 in K562 cells with chronic myeloid leukemia cell line K562 cells . The effect of ATO on the proliferation of K562 cells was observed by MTT assay . The results showed that the expression of CD44 in K562 cells was significantly decreased after 24 h , 48 h and 72 h in the control group ( P = 0 . 05 ) . The effect of ATO on cell cycle distribution of K562 cells was observed by flow cytometry . The results of flow cytometry showed that the percentage of G0 / G1 phase , S phase , G2 / M phase in the control group and 1 , 2 , 2.5 , 5 , 10 渭mol / L ATO group were 48 hours later ( see Table 4 ) . The effect of ATO on the expression level of Cyclin D1 in K562 cells was significantly lower than that of the control group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.7

【参考文献】