Semaphorin 3A在NSCLC表达的临床意义及抑制上皮间质转化的机制

发布时间：2018-04-23 04:28

本文选题：非小细胞肺癌 + 上皮间质转化　；参考：《天津医科大学》2015年博士论文

【摘要】：目的:1.研究 Semaphorin3A(SEMA3A)和基质金属蛋白酶-14(matrix metalloproteinase,MMP-14)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中表达的临床意义及其预后价值。2.研究上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标记物 E-钙粘蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)在NSCLC中表达的临床意义及预后价值,分析其与SEMA3A表达的相关性。3.观察外源性SEMA3A对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)介导的肺癌A549细胞发生EMT的调节作用。方法:1.选择94例NSCLC术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择80例正常肺组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测二组中SEMA3A和MMP-14蛋白的表达,分析NSCLC中SEMA3A及MMP-14的关系,探讨联合检测SEMA3A及MMP-14蛋白对预后的判断价值。2.采用免疫组织化学染色技术检测E-cadherin和vimentin在NSCLC中表达的临床病理意义,分析二者在NSCLC中表达的相关性和预后价值,分析其与SEMA3A在NSCLC中表达的联系和相关性。3.采用TGF-β1体外诱导A549细胞发生EMT,并予以外源性的SEMA3A预处理,观察细胞形态,采用划痕实验检测细胞迁移能力,免疫细胞化学染色检测vimentin的表达,免疫印迹法检测E-cadherin和vimentin的蛋白表达水平。结果:1.SEMA3A主要表达于细胞胞浆,在80例正常组中有60例SEMA3A阳性表达,阳性表达率为75.00%,显著高于NSCLC组的36.17%(34/94),经χ2检验,差异具有统计学意义(P0.05)。SEMA3A在NSCLC组中的表达与无胸膜侵袭、无淋巴结转移、淋巴结转移个数少于4个、PCNA阳性率低于25.00%、高中分化程度、无脉管侵袭和肿瘤直径小于5cm关系密切(P0.05)。2.MMP-14主要表达于细胞胞膜,胞浆内亦有部分阳性表达。在80例正常组中,仅有20例阳性表达,阳性表达率为25.00%;显著低于NSCLC组的75.53%(71/94),两组经χ2检验,差异具有统计学意义(P0.05)。MMP-14在NSCLC组中的表达与有胸膜侵袭、有淋巴结转移、淋巴结转移个数多于4个、PCNA阳性率高于25.00%、低分化程度和有脉管侵袭关系密切(P0.05)。3.经线性相关分析显示,NSCLC组中SEMA3A及MMP-14的表达呈负相关性(r=-0.852,P=0.000)。生存期相关性分析结果显示,SEMA3A低表达及MMP-14的高表达与生存时间呈负相关(P0.05),即SEMA3A低表达、MMP-14高表达的患者预后差。4.E-cadherin主要表达于细胞膜,也可以表达在细胞浆。在80例正常组中有62例E-cadherin阳性表达,阳性表达率为77.50%,显著高于NSCLC组的41.49%(39/94。)经χ2检验,差异具有统计学意义(P0.05)。E-cadherin在NSCLC中的阳性表达与无胸膜侵袭、无淋巴结转移、淋巴结转移个数少于4个、PCNA阳性率低于25%、高中分化程度、无脉管侵袭关系密切(P0.05)。5.vimentin表达于细胞浆。在80例正常组中,仅有6例阳性表达,阳性表达率为7.50%;显著低于NSCLC组的44.68%(42/94),两组经χ2检验,差异具有统计学意义(P0.05)。vimentin在NSCLC组中的表达与有胸膜侵袭、有淋巴结转移、淋巴结转移个数多于4个、PCNA阳性率高于25%、低分化程度和有脉管侵袭关系密切(P0.05)。6.经线性相关分析显示,NSCLC组中vimentin及E-cadherin的表达呈负相关性(r=-0.793,P= 0.000);而SEMA3A与E-cadherin的表达呈正相关性(r=0.857,P=0.000);SEMA3A 与 vimentin 的表达呈负相关(r=-0.785,P=0.000)。生存期相关性分析结果显示,E-cadherin低表达、vimentin高表达的患者预后差。7.予以5ng/ml TGF-β1诱导48h后,可见A549细胞由原有的铺路石样,转化成纺锤体形或长梭形,细胞间连接消失,细胞间隔变大,呈离散状态。划痕实验结果显示,TGF-β1能够显著促进A549细胞迁移,迁移率为75.67%±4.51%,是对照组(33.00%±7.00%)的 2.29 倍(P=0.000);免疫细胞化学染色结果显示,对照组无vimentin阳性表达,而予以TGF-β1诱导后,可见vimentin阳性表达,胞浆内出现棕黄色丝状排列结构;Western blot结果显示TGF-β1诱导48 h后,vimentin蛋白表达明显上调,是对照组的6.86倍,E-cadherin蛋白表达明显下调,是对照组的5.70%。而予以SEMA3A预处理,能够下调TGF-β1介导的A549细胞EMT的发生,抑制上述变化。结论:1.SEMA3A在NSCLC临床样本中低表达,伴随着MMP-14高表达、E-cadherin低表达和vimentin高表达,并与肿瘤的胸膜侵犯、淋巴结转移、淋巴结转移个数、分化程度、脉管浸润及PCNA的表达密切相关,同时多提示预后不良。可能与肿瘤细胞粘附缺失获得运动能力,侵袭能力增强有关。并为评估NSCLC的恶性程度、诊断以及预后提供了新的生物学指标。2.TGF-β1能够显著促进A549细胞发生EMT,细胞形态由铺路石样变为类成纤维细胞样,同时伴随着迁移能力的提高;予以外源性SEMA3A预处理,能够显著抑制该变化。
[Abstract]:Objective : To investigate the clinical significance and prognostic value of SEMA3A and MMP - 14 in NSCLC . The positive rates of MMP - 14 and MMP - 14 in NSCLC were significantly higher than that in NSCLC group ( P0.05 ) . The positive expression of E - cadherin in NSCLC was significantly lower than that in NSCLC group ( P0.05 ) . The results showed that the expression of vimentin in A549 cells was significantly higher than that of control group ( 33.00 % 卤 7.00 % ) .

【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2

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