脂质体在克服肿瘤细胞多药耐药性中的研究

发布时间：2018-04-23 05:25

  本文选题：多药耐药性 + pH-敏感型脂质体　； 参考：《西北农林科技大学》2017年硕士论文

【摘要】：针对肿瘤的化疗药物的多次给药会使得肿瘤细胞产生多药耐药性,由于肿瘤细胞的多药耐药性严重影响了恶性肿瘤的治疗效果,因此迫切需要新的治疗方法和药物来帮助癌症患者延长生存时间。目前,如何克服肿瘤的多药耐药性是攻克恶性肿瘤的重要难题。脂质体因为其较好的生物可降解性和生物相容性,是临床上较为常用的纳米药物载体。因此利用脂质体作为逆转卵巢癌细胞多药耐药性的药物和基因载体,具有较好的临床应用前景。针对肿瘤细胞多药耐药性的问题,本论文分别从直接抑制外排泵蛋白作用和抑制耐药基因表达的两种角度设计制备了脂质体药物载体和脂质体基因载体。应用pH-敏感型脂质体共传递阿霉素和外排泵蛋白抑制剂Tariquidar克服卵巢癌细胞的耐药性,本文成功地制备了pHSL/TQR1/DOX0.05,其DOX载药率为5%,TQR载药率为1%,粒径为144±7nm,电势为-28.1±0.7mV。体外测试表明,该脂质体呈现出优异的pH敏感释放性质。细胞实验显示,DOX浓度为8.0μg/mL时,pHSL/TQR1/DOX0.05对OVCAR8/ADR的细胞活性为6.6%,对照组pHSL/DOX0.05和游离DOX溶液对OVCAR8/ADR的细胞活性分别为64.0%和43.5%,游离DOX溶液对OVCAR8的细胞活性为7.3%,可以得到当DOX浓度为8.0μg/mL时,与对照组的抑制作用相比较,pHSL/TQR1/DOX0.05对细胞的抑制作用强,几乎完全逆转耐药性,因为其抑制作用与游离DOX溶液对OVCAR8细胞的抑制作用相当。pHSL/TQR1/DOX0.05能够有效地递送阿霉素药物进入细胞的内部而不被外排,从而有效地抑制了耐药细胞OVCAR8/ADR的增殖作用。同时pHSL/TQR毒性非常低。因此,较低的载体毒性和较高的肿瘤细胞抑制作用使得pHSL/TQR1/DOX0.05是一种非常有前景的克服肿瘤多耐药性的复合载体。应用脂质/高分子/核酸复合物(LPD)转染CRISPR-Cas9质粒,以降低耐药基因MDR的表达,进而提高耐药细胞对抗癌药物阿霉素的敏感性。首先成功制备包封绿色荧光蛋白(GFP)质粒和聚乙烯亚胺(PEI,支链型25kDa)的LPD,并成功将其转染至293T细胞。该脂质体载体的的粒径为117±6nm,电势为43.4±0.8mV。并且当LPD中Liposome/PEI/DNA的电荷比为1:0.8:1时转染率效率达到92.7%,而阳性对照Lipofectamine2000的转染效率是97.8%。但是应用LPD转染CRISPR-Cas9质粒进入耐药细胞OVCAR8/ADR和MCF7/ADR中,转染效率都非常低。通过设计完成阳性对照实验,分析转染效率低的原因是耐药细胞本身不利于质粒转染。
[Abstract]:The drug resistance of OVCAR8 / ADR was significantly inhibited by using liposome as a drug and gene carrier for reversal of multidrug resistance of ovarian cancer cells .

【学位授予单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R730.53

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本文编号：1790652