RNAi沉默CD59对急性T系白血病Jurkat细胞株增殖的影响

发布时间：2018-04-28 13:57

  本文选题：RNA干扰 + CD　； 参考：《免疫学杂志》2017年01期

【摘要】：目的运用RNAi慢病毒沉默CD59的表达,观察其对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响。方法构建CD59 RNAi-EGFP融合蛋白慢病毒载体,转染急性T系白血病Jurkat细胞株,筛选出稳定转染的细胞系,空病毒组为阴性对照,未处理的Jurkat细胞系作为空白对照;荧光显微镜和流式细胞仪观察各组的细胞转染效率;ELISA检测各组细胞CD59的表达情况;RT-PCR检测各组CD59基因以及凋亡相关基因Bcl-2/Bax m RNA的表达;CCK8表达检测细胞增殖效率的改变;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果荧光显微镜和FCM观察转染效率在90%以上;ELISA结果显示实验组细胞CD59蛋白表达降低;RT-PCR结果显示实验组CD59、Bcl-2 m RNA表达水平降低(P0.05),Bax m RNA表达水平升高(P0.05);CCK8结果显示实验组细胞增殖效率明显降低(P0.05);流式细胞仪结果显示沉默CD59的表达能够促进细胞凋亡(P0.05)。结论沉默D59基因表达可抑制急性T系白血病Jurkat细胞株的增殖能力并诱导细胞凋亡,为临床急性T系白血病的治疗提供了新靶标、新思路。
[Abstract]:Objective to observe the effect of RNAi lentivirus on the proliferation and apoptosis of Jurkat cell line of acute T lymphocyte leukemia (AML) by silencing the expression of CD59. Methods CD59 RNAi-EGFP fusion protein lentivirus vector was constructed and transfected into Jurkat cell line of acute T-lineage leukemia. Stable transfected cell lines were selected. The empty virus group was negative control and the untreated Jurkat cell line was used as blank control. Fluorescence microscope and flow cytometry were used to observe the efficiency of cell transfection and Elisa to detect the expression of CD59 in each group. RT-PCR was used to detect the expression of CD59 gene and the expression of apoptosis-related gene Bcl-2/Bax m RNA. Apoptosis was detected by flow cytometry. Results fluorescence microscope and FCM showed that the transfection efficiency was more than 90%. The results of Elisa showed that the expression of CD59 protein in the experimental group was decreased. The result of RT-PCR showed that the expression of CD59 Bcl 2 m RNA decreased in the experimental group. The expression level of Bax m RNA in the experimental group was increased. The results showed that the expression level of CD59 protein in the experimental group was higher than that in the experimental group. The results of flow cytometry showed that silencing the expression of CD59 could promote cell apoptosis. Conclusion silencing the expression of D59 gene can inhibit the proliferation ability and induce apoptosis of Jurkat cell line of acute T-lineage leukemia, which provides a new target and new idea for clinical treatment of acute T-lineage leukemia.
【作者单位】： 青岛大学医学院;山东农业大学生命科学院;
【基金】：国家自然科学基金(81273206)
【分类号】：R733.71

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