宫颈癌发生及转移与Pin1诱导上皮—间质转化（EMT）及其基因表达调控的关系研究

发布时间：2018-04-30 03:37

  本文选题：宫颈鳞癌 + 肽基脯氨酰同分异构酶(Pin1)　； 参考：《新疆医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:本研究以维吾尔族妇女宫颈癌为对象,从肿瘤组织和细胞水平上,明确宫颈癌发生、扩散及转移与肽基脯氨酰同分异构酶(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase,Pinl)可能诱导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及调节上皮和间质组织属性基因表达水平的关系,探讨基于EMT的宫颈癌发病机制、早期预警和临床治疗检控指标。方法:(1)收集宫颈标本组织标本共189例,其中宫颈鳞癌(CSCC)16例、宫颈上皮内瘤变(CINⅡ-Ⅲ)32例和正常对照41例,采用免疫组织化学方法检测 Pin1、E-cadherin、N-cadherin、β-catenin、Snail1及Vimentin)蛋白质表达水平,分析肿瘤临床参数与上述指标变化的关系。(2)实时荧光定量PCR技术检测宫颈癌HeLa,SiHa,C33a细胞中Pin1 mRNA本底表达;针对Pin1的cDNA序列,构建短发夹RNA干扰载体(shRNA),转染SiHa细胞,建立RNAi表达细胞模型,运用实时荧光定量PCR和Western blot技术验证转染后Pin1 mRNA和蛋白水平的变化;同时检测转染Pin1-siRNA后,SiHa宫颈癌细胞内EMT 相关蛋白 E-cadherin、β-catenin、N-cadherin、Snail1 和 Vimentin mRNA 和蛋白水平情况;(3)应用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、细胞划痕实验及流式细胞仪技术,分别分析Pin1特异性sh-RNA转染后,宫颈癌细胞增殖活性,迁移率和细胞凋亡率的细胞生物学指标。结果:(1)免疫组织化学分析结果显示,随着宫颈癌及癌前病变发生,Pin1蛋白质表达水平显著上升(P0.05),N-cadherin和Snail1等间质组织属性蛋白质表达水平显著上调(P0.05),而E-cadherin和β-catenin等上皮组织属性蛋白质表达水平显著下调(P0.05),而且宫颈癌的较高临床分期、中低组织分化和淋巴结转移也伴有上述5种蛋白质表达水平的显著变化(P0.05),可能呈现一种Pin1诱导的宫颈癌上皮-间质转化(EMT)、恶性转化和转移趋势。(2)HeLa、SiHa和C33a宫颈癌细胞均有Pin1 mRNA表达,其中SiHa宫颈癌细胞内表达水平较高;Pin1特异性sh-RNA转染后,Pin1转录和蛋白表达水平显著下调,伴有E-cadherin和β-catenin等上皮组织属性基因表达水平显著上调,而N-cadherin、Snail1和Vimentin等间质组织属性基因表达水平显著上调(P0.05),呈现Pin1诱导的EMT相关基因表达调控趋势;根据细胞生物学指标分析,Pin1特异性sh-RNA转染后,SiHa宫颈癌细胞增殖活性显著下降(P0.05),细胞迁移能力降低,细胞凋亡率增加,呈现典型的EMT相关细胞表型。结论:(1)临床基础研究显示,宫颈癌发生、恶性转化、中低分化和转移可能伴有Pin1和间质组织属性基因表达水平上调,上皮组织属性基因表达下调,存在典型的EMT发展过程;(2)根据RNAi细胞模型研究,抑制宫颈癌细胞内Pin1表达,引起上皮组织属性基因下调,间质组织属性基因表达上调,在一定程度上逆转EMT相关基因表达调控和细胞表型变化,推测Pin1可能调节上皮和间质组织属性基因表达调控,从而诱导宫颈上皮组织的EMT过程。
[Abstract]:Objective: to identify the occurrence of cervical cancer in Uygur women from tumor tissue and cell level. The relationship between proliferation and metastasis and peptidyl-prolyl cis-trans isomerasePinl) may induce epithelial-mesenchymal transition (EMT) and regulate the expression of epithelial and interstitial tissue attribute genes, and explore the pathogenesis of cervical cancer based on EMT. Early warning and clinical treatment prosecution indicators. Methods A total of 189 cervical tissue specimens were collected, including 16 cases of cervical squamous cell carcinoma, 32 cases of cin 鈪，

本文编号：1822924