NMI下调hTERT抑制乳腺癌细胞干性特点
本文选题：乳腺癌干细胞 + NMI ； 参考：《大连医科大学》2017年硕士论文
【摘要】：目的:乳腺癌是全球癌症中导致女性死亡的主要因素之一。目前主要的治疗方法包括手术、放疗以及化疗。然而,即使通过治疗,乳腺癌也存在一定的可能性复发,而造成这种可能的主要原因之一,便是由于乳腺癌干细胞的存在。研究表明,乳腺癌组织中存在一群CD44+CD24-的肿瘤细胞,它们具有极强的复制及自我更新能力,将此细胞群称为乳腺癌干细胞。它们数量极少,但对于常规的放化疗不敏感,因此靶向乳腺癌干细胞是目前治疗乳腺癌的重要方向。NMI是一种能与多种转录因子结合的蛋白,它通过与其它转录因子的结合,参与多种细胞活动,如DNA损伤、细胞周期及上皮-间质转化等,并且在乳腺癌细胞中,主要发挥抑癌作用。然而,NMI对于乳腺癌干细胞的影响目前知之甚少。因此,进一步研NMI在乳腺癌干细胞发生发展中的功能和具体的分子机制,从而为乳腺癌的诊断和治疗提供新靶标具有重要意义。方法:1.通过成球实验富集乳腺癌干细胞并利用流式细胞术检测其CD44/CD24表达情况;利用Western blot及q RT-PCR检测NMI及干性指标Nanog、Oct4及Sox2的表达情况;利用GEO数据库GSE15192 m RNA表达数据,分析在CD44+CD24-及CD44-CD24+细胞群体中,NMI、CD44及CD24的表达情况。2.敲低及过表达NMI后,通过Western blot,q RT-PCR,成球实验及流式细胞术,检测NMI对于乳腺癌干细胞干性特性的影响。3.通过检测NMI敲低后,h TERT启动子荧光素酶活性,检测NMI是否能影响h TERT转录活性;通过检测NMI敲低后进行Western blot,检测NMI能否影响h TERT蛋白水平;通过敲低NMI同时敲低h TERT,或者过表达NMI同时过表达h TERT后进行Western blot、流式细胞术、成球实验、transwell及免疫荧光,检测NMI对于乳腺癌细胞干性特点的影响,是否是通过h TERT介导的。4.动物实验,通过皮下注射肿瘤细胞,构建裸鼠荷瘤动物模型,检测NMI稳定敲低/过表达的细胞系及其对照细胞系成瘤能力变化情况,并同时引入h TERT,进行rescue实验;通过尾静脉注射NMI稳定过表达细胞系及其对照细胞系,检测NMI过表达后,对于乳腺癌细胞转移能力的影响。5.利用GEO数据库,分析NMI与h TERT表达的相关性;利用组织芯片,进行免疫组织化学染色,检测NMI与h TERT表达的相关性;分析NMI,h TERT与临床病理分期及预后的关系。6.利用免疫共沉淀及质谱,寻找与NMI共同作用于h TERT的转录因子,并进行Western blot验证。结果:1.相比于乳腺癌细胞,NMI在乳腺癌干细胞中呈低表达;2.敲低NMI,能增强干性相关基因NANOG、OCT4及SOX2的表达,增强乳腺癌细胞成球能力及CD44+CD24-细胞群体比例;3.过表达NMI,能抑制干性相关基因NANOG、OCT4及SOX2的表达,抑制乳腺癌细胞成球能力及CD44+CD24-细胞群体比例;4.NMI通过抑制h TERT转录,从而影响乳腺癌细胞干性特征;5.NMI通过h TERT影响乳腺癌细胞上皮-间质转化能力及裸鼠成瘤能力;6.在临床样本中,NMI与h TERT表达呈负相关;7.NMI通过与YY1相互作用下调h TERT。结论:在正常乳腺组织中NMI表达水平较癌组织高,且NMI与h TERT表达呈负相关。细胞水平实验表明,NMI能抑制乳腺癌细胞干性特点,且该能力是由h TERT介导。NMI通过抑制h TERT转录,从而抑制乳腺癌细胞干性特点。
[Abstract]:Purpose : Breast cancer is one of the main factors leading to female death in cancer of breast cancer . The main reasons for breast cancer stem cell are surgery , radiotherapy and chemotherapy . The expression of NMI , CD44 and CD24 in breast cancer stem cells is studied by Western blot and q RT - PCR . The expression of NMI in breast cancer cells was determined by subcutaneous injection of NMI . NMI can inhibit the dry character of breast cancer cells , and the ability is mediated by h . NMI can inhibit the transcription of hTERT , thus inhibiting the dry character of breast cancer cells .
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9
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，本文编号：1827933
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