LncRNA ZFAS1在胃癌中的作用和诊断价值研究

发布时间：2018-05-10 15:31

本文选题：胃癌 + 长链非编码RNA　；参考：《江苏大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:检测长链非编码RNA(long noncoding RNA,lnc RNA)锌指结构反义转录本1(zinc finger antisense 1,ZFAS1)在胃癌患者肿瘤组织、血清及血清外泌体(exosome)中的表达水平,分析其与临床病理指标的相关性,探讨ZFAS1在胃癌发生发展中的作用及机制,为胃癌提供新的诊断标志物和治疗靶点。方法:1、结合生物信息学分析和文献检索选择10种肿瘤相关lnc RNA(CCAT1、MALAT1、PVT1、HULC、GAS5、MYCLO-2、ZFAS1、lnc RNA-ATB、HOTTIP、linc RNA-p21),采用实时荧光定量RT-PCR筛选在胃癌细胞中表达显著改变(倍数≥2)的lnc RNA。2、采用实时荧光定量RT-PCR检测ZFAS1在胃癌患者肿瘤组织、血清及血清外泌体中的表达水平,结合患者的临床病理资料,统计分析ZFAS1表达水平与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期等病理因素之间的相关性;分析ZFAS1在血清中的稳定性,探讨其潜在诊断价值。3、采用质粒介导sh RNA干扰ZFAS1在胃癌细胞MGC-803和BGC-823中表达,ZFAS1过表达质粒转染MKN-28胃癌细胞,实时荧光定量RT-PCR检测sh RNA干扰和过表达效率;生长曲线和克隆形成实验检测干扰和过表达后细胞增殖能力;Transwell迁移实验检测干扰和过表达后细胞迁移能力;流式细胞术检测处理后细胞周期和细胞凋亡变化;实时荧光定量RT-PCR和western blot检测ZFAS1对细胞增殖和迁移相关基因及蛋白表达的影响。4、提取胃癌细胞BGC-823来源的外泌体,采用透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA)、western blot鉴定外泌体;采用外泌体处理MKN-28细胞,实时荧光定量RT-PCR检测处理后ZFAS1表达水平;生长曲线和克隆形成实验检测外泌体处理后细胞的增殖能力;Transwell迁移实验检测处理后细胞的迁移能力;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时荧光定量RT-PCR和western blot检测处理后细胞增殖、迁移相关基因及蛋白表达的变化。结果:1、实时荧光定量RT-PCR检测结果表明ZFAS1表达在胃癌患者肿瘤组织、血清以及血清外泌体中显著增加,并且在血清中稳定存在。2、病理相关性分析结果表明胃癌患者肿瘤组织、血清及血清外泌体中ZFAS1高表达均与淋巴结转移、TNM分期显著相关(P(27)0.05)。3、sh RNA干扰后ZFAS1表达降低,过表达后ZFAS1表达增加;干扰和过表达实验结果表明ZFAS1能促进细胞周期进程,抑制细胞凋亡,诱导上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),从而增强胃癌细胞增殖和迁移能力。4、透射电镜显示外泌体呈椭圆形双层膜囊泡结构,纳米颗粒跟踪分析显示外泌体的大小为50-150nm,浓度为1.0×1011~2.5×1011微粒/毫升,western blot结果表明外泌体含有丰富的CD9和CD81,流式细胞仪检测结果显示MKN-28细胞具有较强的外泌体内吞能力。5、外泌体处理后,ZFAS1在MKN-28细胞中表达显著增加,MKN-28细胞增殖和迁移能力增强,处于S期的细胞比例增加,MKN-28细胞中cyclin D1、Bcl-2、N-cadherin、Slug、Snail、Twist、ZEB1表达增加,Bax、E-cadherin表达降低,细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinas,ERK)无明显改变,而磷酸化ERK(p-ERK)表达增加。结论:ZFAS1在胃癌患者肿瘤组织、血清和血清外泌体中高表达,且表达水平与淋巴结转移和TNM分期显著相关;ZFAS1能加快细胞周期进程,抑制细胞凋亡,诱导EMT发生,促进胃癌细胞增殖和迁移;外泌体能通过转运ZFAS1促进胃癌恶性进展。因此,ZFAS1有望成为胃癌诊断和治疗的新分子标志物。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression level of antisense transcript of long noncoding RNA ( lnc RNA ) zinc finger structural antisense transcript 1 ( ZFAS1 ) in tumor tissues , serum and exosome of gastric cancer patients , and to investigate the correlation between the expression levels of ZFAS1 in gastric cancer patients and pathological factors such as sex , age , tumor size , lymph node metastasis and TNM stage . The expression of ZFAS1 in gastric cancer patients was detected by RT - PCR and Western blot . The results showed that the expression of ZFAS1 increased significantly in gastric cancer patients . Conclusion : ZFAS1 can accelerate cell cycle progression , inhibit cell apoptosis , induce EMT to occur , promote gastric cancer cell proliferation and migration , and ZFAS1 is expected to be a new molecular marker for the diagnosis and treatment of gastric cancer .

【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

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