GANT61对多发性骨髓瘤细胞Notch信号通路的影响

发布时间：2018-05-18 21:34

本文选题：多发性骨髓瘤 + GANT61　；参考：《承德医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:探索GANT61对体外培养的人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226及U266中Notch信号通路的影响,并初步探讨在多发性骨髓瘤细胞中Notch信号通路与Hedgehog信号通路之间的关系,为多发性骨髓瘤的基础研究和靶向药物的研制及开发提供实验数据。方法:1细胞培养:人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266,本实验共分以下组别:空白对照组,2.5、5、10umol/L GANT61组。2采用CCK-8法检测不同浓度的GANT61(2.5、5、10、20、30、40、50umol/L)处理RPMI8226和U266细胞株不同时间(18h、24h、36h)后细胞的增殖抑制率变化。3采用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)检测不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理上述MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后对于Notch信号通路中受体Notch1,配体Jagged1、Jagged2和靶基因Hes1的m RNA表达的影响。4采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理上述MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后对于Notch信号通路中受体Notch1,配体Jagged1、Jagged2和靶基因Hes1蛋白表达的影响。结果:1采用CCK-8法检测GANT61对MM细胞株的增殖抑制率不同浓度的GANT61(2.5、5、10、20、30、40、50umol/L)处理RPMI8226和U266细胞株18h、24h、36h后的增殖抑制率见图1、2和表1、2,结果可见随着GANT61浓度的增加及处理时间的延长,细胞的增殖抑制率逐渐增高,呈时间和浓度依赖性。同一时间,不同浓度GANT61的抑制率与空白对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05),组内比较情况见表1、2,以24h为例,在RPMI8226细胞株中,2.5、5、10、20、30、40、50umol/L GANT61的抑制率分别为(0.13±0.02)%、(0.19±0.04)%、(0.30±0.01)%、(0.45±0.00)%、(0.58±0.02)%、(0.63±0.02)%、(0.70±0.02)%,而U266相对应的抑制率分别为(0.16±0.04)%、(0.25±0.02)%、(0.42±0.02)%、(0.53±0.01)%、(0.63±0.01)%、(0.71±0.05)%、(0.73±0.01)%;同一浓度不同时间的比较见表1、2,以5umol/LGANT61为例,18h、24h、36h的抑制率在RPMI8226中分别为(0.15±0.03)%、(0.19±0.04)%、(0.22±0.04)%,在U266中,分别为(0.23±0.00)%、(0.25±0.02)%、(0.36±0.04)%。根据该实验结果,选取GANT61的浓度为2.5、5、10umol/L,时间选定18h、24h、36h进行后期实验。2 GANT61对MM细胞株RPMI8226和U266中Notch1 m RNA和蛋白表达的影响2.1经RT-q PCR分析,GANT61下调RPMI8226和U266细胞Notch1的m RNA表达。不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理MM细胞株24h后,与空白对照组比较,Notch1m RNA表达量随GANT61浓度的增加逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05);5umol/L GANT61处理MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后,与空白对照组相比,Notch1 m RNA的表达量随处理时间的延长逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。2.2经Western Blot分析,GANT61下调RPMI8226和U266细胞Notch1蛋白的表达。不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理MM细胞株24h后,与空白对照组比较,Notch1蛋白表达量随GANT61浓度的增加逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05);5umol/L GANT61处理MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后,与空白对照组相比,Notch1蛋白的表达量随处理时间的延长逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。3 GANT61对MM细胞株RPMI8226和U266中Jagged1、Jagged2m RNA和蛋白表达的影响3.1经RT-q PCR分析,GANT61下调RPMI8226和U266细胞Jagged1、Jagged2的m RNA表达。不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理MM细胞株24h后,与空白对照组比较,Notch1m RNA表达量随GANT61浓度的增加逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05);5umol/L GANT61处理MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后,与空白对照组相比,Jagged1、Jagged2 m RNA的表达量随处理时间的延长逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。3.2经Western Blot分析,GANT61下调RPMI8226和U266细胞Jagged1、Jagged2蛋白的表达。不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理MM细胞株24h后,与空白对照组比较,Jagged1、Jagged2蛋白表达量随GANT61浓度的增加呈现逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05);5umol/L GANT61处理MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后,与空白对照组相比,Jagged1、Jagged2蛋白的表达量随处理时间的延长逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。4 GANT61对MM细胞株RPMI8226和U266中Hes1 m RNA和蛋白表达的影响4.1经RT-q PCR相对定量分析,GANT61下调RPMI8226和U266细胞Hes1的m RNA表达。不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理MM细胞株24h后,与空白对照组比较,Hes1m RNA表达量随GANT61浓度的增加逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05);5umol/L GANT61处理MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后,与空白对照组相比,Hes1m RNA的表达量随处理时间的延长逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。4.2经Western Blot分析,GANT61下调RPMI8226和U266细胞Hes1蛋白的表达。不同浓度的GANT61(2.5、5、10umol/L)处理MM细胞株24h后,与空白对照组比较,Hes1蛋白表达量随GANT61浓度的增加逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05);5umol/L GANT61处理MM细胞株不同时间(18h、24h、36h)后,与空白对照组相比,Hes1蛋白的表达量随处理时间的延长逐渐减少,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:1 GANT61能够抑制多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和U266的生长,且这种增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性。2 GANT61可以下调RPMI8226和U266细胞Notch信号通路中受体Notch1、配体Jagged1、Jagged2以及靶基因Hes1的m RNA和蛋白的表达,该抑制作用具有时间和浓度依赖性。
[Abstract]:Objective : To investigate the effects of GANT61 ( 2.5 , 5 , 10 , 20 , 30 , 40 , 50 渭mol / L ) on the expression of Notch1 , Jagged1 , Jagged2 and Hes1 in human multiple myeloma cell line RPMI8226 and U266 in vitro . The effects of GANT61 ( 2.5 , 5 , 10渭mol / L ) on the expression of Notch1mRNA and protein in human MM cell line RPMI8226 and U266 were significantly decreased with the increase of the concentration of GANT61 ( P0.05 ) . Compared with blank control group , the expression of Hes1 protein decreased gradually with the increase of the concentration of GANT61 ( P0.05 ) .
【学位授予单位】：承德医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.3

【参考文献】