MicroRNA-27a调控骨肉瘤生物学行为的机制研究

发布时间：2018-05-20 03:16

  本文选题：骨肉瘤 + miRNA表达谱　； 参考：《华中科技大学》2015年博士论文

【摘要】：目的：探索miRNA在不同骨肉瘤细胞系中的表达特征及差异,明确骨肉瘤细胞miRNA的共同表达谱,并为后续的机制研究提供方向指导。 方法：收集四种人骨肉瘤细胞系(U-20S, Saos-2, MNNG/HOS, MG63)和人成骨细胞系(hFOB),提取细胞中的总RNA,应用miRNA表达谱芯片进行扫描筛查分析,建立骨肉瘤细胞系的miRNA表达谱。 结果：应用miRNA表达谱芯片检测四种人骨肉瘤细胞系(U-2OS, Saos-2, MNNG/HOS, MG63)和人成骨细胞系(hFOB)之间具有差异性表达特点的miRNA。我们发现：相对于人成骨细胞系,在四种人骨肉瘤细胞系中表达差异达2倍及以上的miRNA共有27个,其中表达水平上调的miRNA共有23个(let-7e-5p, miR-20b-5p, miR-92a-3p, miR-125a-5p, miR-196a-5p, miR-214-3p, miR-20a-5p, miR-181a-5p, miR-29b-3p, miR-10b-5p, miR-301a-3p, miR-181d, miR-21-5p, miR-206, miR-7-5p, miR-29a-3p, miR-17-5p, miR-210, miR-25-3p, miR-18a-5p, miR-181c-5p, miR-32-5p, miR-27a-3p),表达水平下调的miRNA共有4个(miR-142-5p, miR-133b, miR-16, miR-144-3p)。 结论：通过miRNA表达谱芯片的检测与筛选,我们发现与人成骨细胞系相对比,在四种入骨肉瘤细胞系(U-2OS, Saos-2, MNNG/HOS, MG63)共有27个miRNA呈差异性表达的特点。这些具有差异性表达的miRNA可以为进一步研究miRNA在骨肉瘤中的作用与功能提供一定的实验基础及方向指导。 目的：观察miR-27a对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭影响及其调控机制。 方法：利用Lipofectamine(?)2000将miR-27a inhibitor、miR-27a negative control、 miR-27a mimics和miR-27a mimics control转染于骨肉瘤细胞系。利用Caspase-3、8和9酶活性试剂盒检测检测Caspase-3、8和9酶活性,流式细胞检测各组细胞的凋亡情况,MTT实验检测对细胞增殖的影响,Transwell迁移与侵袭实验评价细胞迁移侵袭能力,细胞克隆形成实验评价骨肉瘤细胞克隆形成的能力,qRT-PCR和Western blot检测骨肉瘤细胞PUMA、BAK和BAX表达情况。建立裸鼠皮下骨肉瘤瘤模型,绘制肿瘤生长曲线,测量肿瘤体积以及肿瘤重量,qRT-PCR和Western blotting检测PUMA、BAK和BAX表达情况。 结果：与其他组相比,miR-27a inhibitor组骨肉瘤细胞的Caspase-3、9酶活性显著增加(P0.01),Caspase-8酶活性也有增加(与无转染组对比P0.05),细胞的凋亡率显著增加(P0.01),增殖明显受到抑制(P0.01),迁移显著减少(P0.01),细胞的穿膜细胞数显著减少(P0.01),细胞的克隆形成数目显著减少(P0.01)。miR-27a的表达水平与PUMA蛋白表达呈显著的负相关性,荧光素酶报告法证实PUMA基因的3'UTR可以被miR-27a结合。动物实验结果发现,miR-27a inhibitor组裸鼠的肿瘤大小、体积及生长速度比miR-27a inhibitor negative组显著减小(P0.01)。 结论：PUMA是miR-27a的靶基因,抑制miR-27a表达引起PUMA表达上调使骨肉瘤细胞Caspase-3、8和9酶活性增加,凋亡增加,并且可以抑制骨肉瘤细胞增殖、减少骨肉瘤细胞侵袭与迁移,减少骨肉瘤细胞克隆的形成,而且抑制裸鼠的肿瘤生长。
[Abstract]:Aim: to explore the expression characteristics and differences of miRNA in different osteosarcoma cell lines, to clarify the co-expression profile of miRNA in osteosarcoma cells, and to provide guidance for the further study of the mechanism. Methods: four kinds of human osteosarcoma cell lines were collected, including human osteosarcoma cell lines, such as U-20S, Saos-2, MNNG-HOSand MG63. the total RNAs were extracted from human osteosarcoma cell lines, and the miRNA expression profiles of osteosarcoma cell lines were established by scanning and screening with miRNA microarray. Results: four human osteosarcoma cell lines, namely U-2OS, Saos-2, MNNG-HOSMG63) and human osteoblast cell line hFOBwere detected by miRNA microarray. We found that compared with human osteoblast cell lines, there were 27 miRNA in four human osteosarcoma cell lines. 鍏朵腑琛ㄨ揪姘村钩涓婅皟鐨刴iRNA鍏辨湁23涓，

本文编号：1912952