敲减长链非编码RNA ATB抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭

发布时间：2018-05-25 23:11

  本文选题：胶质瘤 + 长链非编码RNA　； 参考：《安徽医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的采用shRNA ATB敲减胶质瘤U87细胞中ATB后,研究其对人胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法本研究采用实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测ATB在人胶质瘤细胞系U87与正常人脑胶质细胞HEB中的表达情况。并在此基础上构建了ATB表达载体sh RNA ATB质粒,利用构建成功的质粒转染人胶质瘤U87细胞株,获取新的U87细胞,该细胞具有低表达ATB的特点。应用MTT法检测敲减ATB后对U87细胞增殖的影响;应用细胞克隆实验检测敲减ATB后对U87细胞克隆增殖能力的影响;应用Transwell实验检测敲减ATB后对U87细胞迁移和侵袭能力的影响。应用Western blot法检测敲减ATB后PCNA蛋白表达情况。结果qRT-PCR结果显示,人脑胶质瘤细胞系U87中ATB表达水平与正常人脑胶质细胞HEB相比,较之明显上调(P0.01);与shRNA正常对照组相比,转染了shRNA-ATB的实验组细胞能的ATB水平显著较少(P0.01);细胞克隆实验显示shRNA-ATB实验组细胞克隆形成能力较shRNA对照组明显降低(P0.01);MTT结果表明敲减细胞内ATB后细胞增殖的速率较sh RNA对照组有明显的较低(P0.01)。Transwell实验进一步验证了敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后,细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P0.01)。此外,Western blot实验进一步验证敲减胶质瘤U87细胞中的ATB后,可使PCNA表达降低。结论靶向敲减U87细胞中的ATB后能够抑制其增殖、迁移和侵袭,表明ATB基因可能是胶质瘤患者的潜在治疗靶点。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of shRNA ATB knockout on the proliferation, migration and invasion of human glioma cell line U87. Methods the expression of ATB in human glioma cell line U87 and normal human glial cell line HEB was detected by real-time quantitative PCRQ RT-PCR. On this basis, the ATB expression vector sh RNA ATB plasmid was constructed and transfected into human glioma U87 cell line by using the constructed plasmid, and a new U87 cell line was obtained. The cell line has the characteristics of low expression of ATB. MTT assay was used to detect the effect of knockdown ATB on U87 cell proliferation; cell clone assay was used to detect the effect of knockdown ATB on U87 cell clone proliferation; Transwell assay was used to detect the effect of ATB knockout on U87 cell migration and invasion. Western blot method was used to detect the expression of PCNA protein after knockout ATB. Results qRT-PCR results showed that the expression of ATB in human glioma cell line U87 was significantly up-regulated than that in normal human glioma cell line HEB, and compared with that in normal shRNA control group. The ATB level of the experimental group transfected with shRNA-ATB was significantly lower than that of the control group, and the cell clone ability of the shRNA-ATB experimental group was significantly lower than that of the shRNA control group. The results showed that the cell proliferation rate after knockdown of ATB in the experimental group was significantly lower than that in the sh group. In the RNA control group, the ATB in U87 cells was further reduced by P0.01U. Transwell assay. The ability of cell migration and invasion was significantly inhibited (P 0.01). In addition, Western blot assay further demonstrated that the expression of PCNA decreased after ATB was reduced in U87 cells. Conclusion targeting ATB in U87 cells can inhibit its proliferation, migration and invasion, suggesting that ATB gene may be a potential therapeutic target for glioma patients.
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R739.41

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