miRNA-302b在结肠癌HT-29细胞“干性”维持中的作用

发布时间：2018-05-31 20:35

  本文选题：结肠癌 + 微小RNA-b　； 参考：《肿瘤防治研究》2017年08期

【摘要】：目的探讨miRNA-302b在结肠癌HT-29细胞"干性"维持中的作用及可能机制。方法体外培养人结肠癌细胞株HT-29,转染miRNA-302b模拟物(miRNA-302b mimics),同时以未转染组(control)和阴性模拟物转染组(negative control-mimics,NC-mimics)作为对照,采用实时定量反转录聚合酶链反应法(real-time PCR)检测HT-29细胞结肠癌"干性"标志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2mRNA的表达情况;采用蛋白印迹法(Western blot)检测以上"干性"标志蛋白表达的变化;采用克隆形成实验及干细胞成球实验分别观察HT-29细胞克隆形成和细胞球形成能力的变化。结果 Realtime PCR结果示,miR-302b mimics转染HT-29细胞48 h,"干性"标志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2 mRNA表达一致性上调(P0.05);Western blot结果示Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2蛋白表达也上调(P0.05)。克隆形成实验及干细胞成球实验结果示,miR-302b mimics转染后HT-29细胞克隆形成和细胞球形成能力增强,与control组和NC-mimics组相比差异均有统计学意义(P0.05)。结论 miRNA-302b可通过上调"干性"标志物Ascl2、Lgr5、Oct4和Sox2的表达促进HT-29细胞的克隆形成和细胞球形成能力,从而在结肠癌"干性"维持中发挥重要作用。
[Abstract]:Objective to investigate the role and possible mechanism of miRNA-302b in the maintenance of colon cancer HT-29 cells. Methods Human colon cancer cell line HT-29 was cultured in vitro and transfected with miRNA-302b mimic RNA-302b mimicsl. The negative control-mimicsNC-mimicswere used as control group and negative control group. Real-time PCR was used to detect the expression of "dry" marker Ascl2Lgr5, Oct4 and Sox2mRNA in HT-29 cells, and Western blotting was used to detect the expression of the above "dry" markers. Clone formation test and stem cell ball forming test were used to observe the changes of HT-29 cell clone formation and cell ball formation ability. Results the results of Realtime PCR showed that the expression of Ascl2Lgr5Oct4 and Sox2 mRNA were up-regulated in HT-29 cells 48 h after transfection with miR-302b mimics. Western blot showed that the protein expression of Ascl2Lgr5OT4 and Sox2 was also up-regulated. The results of clone formation test and stem cell formation test showed that the ability of HT-29 cell clone formation and cell ball formation was enhanced after transfection of miR-302b mimics, and there was significant difference compared with control group and NC-mimics group (P 0.05). Conclusion miRNA-302b can promote the clone formation and cell ball formation of HT-29 cells by upregulating the expression of ASCL 2, Lgr5, Oct4 and Sox2, thus playing an important role in the maintenance of "dry" colon cancer.
【作者单位】： 遵义医学院附属医院消化内科贵州省消化病研究所;
【基金】：国家自然科学基金(81560467) 贵州省科学技术基金项目(黔科合J字LKZ[2013]18号) 贵州省高层次人才科研条件特助经费资助项目(TZJF-2011-32) 遵义医学院博士科研启动基金(F-572)
【分类号】：R735.35

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本文编号：1961199