ADAM17-shRNA对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及机制

发布时间：2018-06-01 00:35

  本文选题：乳腺癌 + 解聚素-金属蛋白酶　； 参考：《山东医药》2017年04期

【摘要】：目的探讨解聚素-金属蛋白酶17(ADAM17)-短发夹RNA(shRNA)对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其可能机制。方法将MCF-7细胞分为无义序列组、对照组、转染组。针对ADAM17基因设计合成4个特异性ADAM17-shRNA(ADAM17-shRNA-1219、ADAM17-shRNA-1508、ADAM17-shRNA-1134、ADAM17-shRNA-297),采用电穿孔法转染MCF-7细胞:无义序列组转染无义序列ADAM17-sh NC,转染组分别转染ADAM17-shRNA序列ADAM17-shRNA-1219、ADAM17-shRNA-1508、ADAM17-shRNA-1134、ADAM17-shRNA-297。对照组加入空白PBS,分别采用利用Real-time PCR、Western blotting法、i CELLigence法及流式细胞仪检测各组ADAM17 mRNA表达水平、ADAM17蛋白表达情况、细胞生长曲线和增殖活性及细胞周期变化。结果 4个ADAM17-shRNA序列对MCF-7细胞的ADAM17基因表达均有抑制作用,以shRNA1219载体的抑制效率最高,与对照组和无义序列组比较差异均具有统计学意义(P均0.05);转染组ADAM17 mRNA及蛋白的表达水平明显低于无义序列组和对照组(P均0.05);转染组细胞增殖活性和细胞生长速度较无义序列组和对照组均显著降低(P均0.05);转染组细胞进入S期和G2/M期的比例降低,绝大多数细胞停留在G0/G1期,与对照组、无义序列组比较差异显著(P均0.05)。结论 ADAM17-shRNA可抑制人乳腺癌MCF-7细胞的增殖活性,机制与其对ADAM17基因具有沉默作用有关。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of depolymerin-metalloproteinase-17 (ADAM17) -short hairpin RNA-shRNAs (RNA-shRNAs) on the proliferation of human breast cancer MCF-7 cells and its possible mechanism. Methods MCF-7 cells were divided into three groups: nonsense sequence group, control group and transfection group. Four specific ADAM17-shRNA-1219 ADAM17-shRNA-15008 and ADAM17-shRNA-1134-ADAM17-shRNA-297 were designed and synthesized for ADAM17 gene. MCF-7 cells were transfected with ADAM17-shRNA-1134-ADAM17-shRNA-297 by electroporation. The MCF-7 cells were transfected with ADAM17-sh ncRNA-1219 ADAM17-shRNA-1219 ADAM17-shRNA-1508ADAM17-shRNA-1134ADAM17-shRNA-297. the cells were transfected with ADAM17-sh ncRNA-1219ADAM17-shRNA-1219ADAM17-shRNA-1508 ADAM17-shRNA-1134ADAM17-shRNA-297. In the control group, the expression of ADAM17 protein, cell growth curve, proliferative activity and cell cycle were detected by Real-time PCR Western blotting CELLigence and flow cytometry. Results the ADAM17 gene expression in MCF-7 cells was inhibited by four ADAM17-shRNA sequences, and the inhibition efficiency of shRNA1219 vector was the highest. The expression levels of ADAM17 mRNA and protein in transfection group were significantly lower than those in nonsense sequence group and control group, and the cell proliferation activity and cell growth rate in transfection group were significantly lower than those in control group and control group. The percentage of cells in S phase and G 2 / M phase in transfection group was significantly lower than that in control group and S phase, and the ratio of S phase and G 2 / M phase in transfection group was significantly lower than that in control group. Most of the cells remained in the G0/G1 phase, and there were significant differences between the control group and the nonsense sequence group (P < 0.05). Conclusion ADAM17-shRNA can inhibit the proliferation of human breast cancer MCF-7 cells, and the mechanism is related to its silencing effect on ADAM17 gene.
【作者单位】： 华北理工大学附属医院;
【基金】：河北省自然科学基金资助项目(C2010001767) 唐山市科学技术研究与发展计划项目[唐科计(2014)16号]
【分类号】：R737.9

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本文编号：1962077