Kiss-1高表达抑制结肠癌SW480细胞的侵袭能力及机制的初步研究

发布时间：2018-06-07 18:51

  本文选题：Kiss-1 + SW480　； 参考：《南华大学》2016年硕士论文

【摘要】：目的:本实验通过将p EGFP-N1-Kiss-1重组真核质粒转染至结肠癌SW480细胞,拟探讨Kiss-1基因高表达抑制结肠癌SW480细胞的侵袭能力及机制的初步研究。方法:将质粒p EGFP-N1-Kiss-1及空载体质粒p EGFP-N1通过脂质体转染的方式瞬时导入结肠癌SW480细胞,转染48h后检测转染效率,然后采用Transwell侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,Realtime PCR和Western-blot方法分别从基因和蛋白水平检测Kiss-1基因对基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)和基质金属蛋白-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表达的影响。结果:1)瞬时转染48小时后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白细胞数,计算转染效率在70%-85%。2)Transwell侵袭小室实验结果证实:实验组穿过基质胶细胞数较空白对照组和阴性对照组降低,差异有统计学意义(P0.05)。3)Real-time PCR结果证实:与阴性对照组相比较,Kiss-1基因相对表达量在实验组中增高,MMP-9和MMP-2基因相对表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。4)Western-blot结果证实:相对于空白对照组和阴性对照组,在实验组中Kiss-1高表达,MMP-9和MMP-2蛋白的表达下调,差异有统计学意义(P0.05)。结论:Kiss-1高表达能明显降低结肠癌SW480细胞的侵袭能力和下调MMP-9与MMP-2表达。
[Abstract]:Aim: in this study, pEGFP-N1-Kiss-1 recombinant eukaryotic plasmid was transfected into colon cancer cell line SW480, and the mechanism of overexpression of Kiss-1 gene against invasion of colon cancer cell SW480 was studied. Methods: pEGFP-N1-Kiss-1 and pEGFP-N1 were transiently transfected into colon cancer SW480 cells by liposome transfection, and the transfection efficiency was determined after 48 h transfection of pEGFP-N1-Kiss-1 and pEGFP-N1. Then the effect of Kiss-1 gene on the expression of matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) and matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was detected by transwell invasive chamber assay. Results after 48 hours of transient transfection, the number of green fluorescent protein cells was observed under fluorescence microscope, and the transfection efficiency was calculated in 70-85.2Transwell invasion chamber. The results showed that the number of GFP cells passing through the matrix in the experimental group was lower than that in the blank control group and the negative control group. The results of real-time PCR showed that compared with the negative control group, the relative expression of Kiss-1 gene increased in the experimental group and decreased the relative expression of MMP-9 and MMP-2 genes in the experimental group. The results of Western-blot showed that Kiss-1 overexpression of MMP-9 and MMP-2 was down-regulated in the experimental group compared with the blank control group and the negative control group, and the difference was statistically significant (P 0.05). Conclusion the high expression of Kiss-1 can significantly reduce the invasion ability of SW480 cells and down-regulate the expression of MMP-9 and MMP-2.
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.35

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本文编号：1992375