二甲双胍通过抑制PLC ε对雄激素非依赖前列腺癌PC-3细胞株生物学行为的影响

发布时间：2018-06-14 21:00

  本文选题：雄激素非依赖前列腺癌 + PLCε、Notch1/Hes1、AR　； 参考：《重庆医科大学》2017年博士论文

【摘要】：目的:探索雄激素非依赖前列腺癌组织、雄激素依赖前列腺癌组织、前列腺增生(BPH)组织中PLCε、Notch1/Hes1、AR的表达情况及其与临床特征的相关分析。方法:收取10例雄激素非依赖前列腺癌组织,35例雄激素依赖前列腺癌,20例前列腺增生组织,采用免疫组织化学方法检测所有组织中PLCε、Notch1/Hes1、AR蛋白表达情况。比较各类组织间PLCε、Notch1、Hes1和AR蛋白表达情况及Notch1、Hes1、AR与PLCε相关分析。结果:免疫组织化学结果显示:前列腺癌组织中的PLCε、Notch1、Hes1蛋白表达比BPH组织中高,两者有统计学意义;雄激素非依赖前列腺癌组织中PLCε、Notch1、Hes1蛋白略高于前列腺癌组织,两者间比较,有统计学意义。AR蛋白在雄激素非依赖前列腺癌组织中表达高于BPH或雄激素依赖前列腺癌组织中,有统计学意义。年龄大于60岁者PLCε、Notch1、Hes1、AR蛋白表达大于小于或等于60岁者,有统计学意义;T2-T4期患者PLCε、Notch1、Hes1、AR表达高于TaT1期患者,有统计学意义;Gleason≥7的患者PLCε、Notch1、Hes、AR表达高于病理分级Gleason7的患者,差异有统计学意义。在所有前列腺癌组织中,Notch1、Hes1、AR与PLCε成正相关(P�d0.05)。结论:雄激素非依赖前列腺癌组织中PLCε、Notch1/Hes1、AR的表达明显高于雄激素依赖前列腺癌、前列腺增生组织。目的:探索敲除PLCε基因对PC-3细胞株的生物学行为的影响。方法:采用CRISPR/Cas9方法构建PLCε基因敲除PC-3细胞株,试验对象分为PC-3细胞株组、PLCε基因敲除PC-3细胞组;两组细胞分别用RPMI-1640培养基培养24h、48h、72h,培养条件为5%的CO2、37℃。分别检测两组细胞的PLCεm RNA,PLCε蛋白,检测细胞增殖,细胞的凋亡率、细胞周期和迁徙、侵袭能力。结果:PLCε敲除PC-3组细胞株的较PC-3细胞组增殖明显被抑制,有统计学意义;PLCε基因敲除组凋亡率明显较PC-3组细胞组高,有统计学意义,PLCε基因敲除组S期细胞的比例明显要高于PC-3组,有统计学意义。结论:PLCε基因敲除后,PC-3细胞增殖受到抑制、凋亡增加,细胞周期被阻滞于S期,细胞迁移、侵袭能力受到抑制。目的:探索二甲双胍是否影响PC-3细胞生物学行为。方法:细胞培养:分为PC-3细胞组、PLCε基因敲除PC-3细胞组,分别用RPMI-1640培养基培养,并分别用0、10、20或40 m M浓度二甲双胍干预,培养24h、48h、72h。检测细胞增殖,凋亡率和细胞周期,细胞迁移和侵袭能力。结果:随二甲双胍浓度的递增PC-3组明显呈二甲双胍剂量依赖抑制细胞增殖,而PLCε基因敲除组随二甲双胍浓度的递增细胞增殖无明显变化,组间比较,有统计学意义。而20m M浓度状态下,PC-3组细胞增殖随时间延长逐渐降低,而PLCε基因敲除组细胞增殖随培养时间延长无明显变化,PLCε基因敲除组细胞增殖低于PC-3组,有统计学意义。在二甲双胍20m M浓度,培养48小时,PC-3组细胞凋亡率增加,而PLCε基因敲除组细胞凋亡率无明显变化,PLCε基因敲除组细胞凋亡率比PC-3组高,有统计学意义;二甲双胍处理后PC-3组细胞被阻滞于S期比例增加,PLCε基因敲除组细胞细胞周期无明显变化,PC-3组细胞被阻滞于S期比例低于PLCε基因敲除PC-3组细胞被阻滞于S期比例,有统计学意义;在二甲双胍20m M浓度,培养48小时,PC-3组细胞迁移、侵袭能力降低,但高于PLCε基因敲除组,有统计学意义。结论:二甲双胍能抑制PC-3细胞株的增殖,增加凋亡、阻滞细胞周期于S期,抑制PC-3细胞的迁移、侵袭能力。目的:探索二甲双胍是否通过抑制PLCε下调Notch1/Hes1和AR。方法:细胞培养同第三部分,采用RT PCR检测PLCε,Notch1、Hes1,AR,PCNA,Cyclin D1,c-fos m RNA;采用Western Blot方法检测PLCε、Notch1、Hes1,AR,PCNA,Cyclin D1,c-fos蛋白表达情况。结果:随二甲双胍浓度的递增,PC-3组PLCε、Notch1、Hes1,AR、PCNA,Cyclin D1和c-fos的m RNA表达有逐渐降低;PLCε基因敲除PC-3组PLCεm RNA不表达,随二甲双胍浓度的递增,Notch1、Hes1,AR的m RNA、PCNA,Cyclin D1和c-fos表达无明显变化,分别和PC-3组比较,均低于PC-3细胞组,有统计学意义。而二甲双胍20m M浓度时,PC-3组随时间的推移,PLCε、Notch1、Hes1,AR、PCNA,Cyclin D1和c-fos的m RNA表达逐渐降低,其表达高于PLCε敲除组,其差异有统计学意义,PLCε敲除组随时间没有变化。各蛋白表达与其分子表达情况一致。结论:二甲双胍能抑制能够抑制PLCε,下调Notch1/Hes1和AR。目的:探索二甲双胍是否增强PC-3细胞对多西他赛的化疗敏感性。方法:细胞培养:将PC-3细胞株分对照组、二甲双胍组(20m M)、多西他赛组(50ng/ml)、二甲双胍联合多西他赛组(二甲双胍20m M,多西他赛50ng/ml),培养24h、48h、及72小时。Western Blot方法检测多西他赛组PLCε、Notch1、Hes1、AR蛋白表达情况。检测细胞增殖,凋亡率和细胞周期,检测细胞迁移、侵袭能力。结果:Western blot结果显示多西他赛50ng/ml,各个时间节点,PC-3细胞PLCε、Notch1、Hes1的蛋白表达变化不明显,AR蛋白随着时间推移表达降低。对照组的细胞增殖率最高,二甲双胍组细胞增殖情况较对照组低、多西他赛组细胞增殖率情况较二甲双胍组低、二甲双胍联合多西他赛组细胞增殖率情况较多西他赛组低,均有统计学意义。各药物处理组凋亡率均随着时间延长凋亡率增加,与对照组比较,二甲双胍组细胞凋亡率情况较对照组高、多西他赛组细胞凋亡率较二甲双胍组高、二甲双胍联合多西他赛组凋亡率较多西他赛组高,均有统计学意义。药物处理组细胞迁移、侵袭能力低于对照组,多西他赛组细胞迁移、侵袭能力低于二甲双胍组;二甲双胍联合多西他赛组细胞迁移、侵袭能力低于多西他赛组,均有统计学意义。结论:二甲双胍能增强多西他赛对PC-3细胞的化疗敏感性。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of PLC 蔚 , Notch1 , Hes1 and AR in prostate cancer tissue and its correlation with clinical features . The results showed that the expression of PLC 蔚 , Notch1 , Hes1 and AR in prostate cancer tissue was higher than that in the patients with BPH or androgen dependent prostate cancer . The results showed that the proliferation of PC - 3 cells was inhibited and the apoptosis rate , cell cycle and invasion ability of PC - 3 cells were significantly higher than those of PC - 3 cells . 鏈夌粺璁″�︽剰涔�.鑰，

本文编号：2018945