GnRHR在胃癌发生发展、分化及侵袭转移中的作用及机制研究
发布时间：2018-06-16 01:49
本文选题：GnRHR + EGFR ； 参考：《苏州大学》2016年博士论文
【摘要】：目的:检测GnRHR在胃癌组织中的表达情况,分析其与胃癌患者预后的相关性,探讨GnRHR在胃癌发生发展、分化及侵袭转移中的作用及相关分子机制。方法:应用RT-PCR方法检测48例术前未接受任何治疗的胃癌患者病理标本中肿瘤和肿瘤旁组织内促性腺激素释放激素受体(GnRHR)mRNA的表达;免疫组化分析肿瘤组织及肿瘤旁组织中GnRHR蛋白的表达。通过卡方检验分析GnRHR表达与肿瘤分期、淋巴结转移及远处转移等临床病理参数的相关性,采用Kaplan Meier和秩检验进行生存分析,探讨GnRHR表达对胃癌患者预后的影响。按肿瘤分化程度将48例胃癌患者肿瘤组织标本分为分化差、分化良好两组,应用免疫组织化SP及原位定量法,对48例不同分化程度的胃癌组织中GnRHR、表皮生长因子受体(EGFR)的表达进行检测及半定量分析。Western blot检测三种不同分化程度胃癌细胞中GnRHR表达情况;采用不同浓度(1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/l)GnRH激动剂醋酸曲普瑞林作用于三种不同分化程度的胃癌细胞株,MTT实验观察其对胃癌细胞增殖的影响。Western blot检测GnRHR及分化相关蛋白表达情况。采用transwell小室检测GnRH激动剂醋酸曲普瑞林激活胃癌细胞GnRHR后细胞侵袭和迁移能力;Western blot检测GnRHR激活后胃癌细胞EMT相关蛋白E-cad、vimentin及snail的表达情况。采用酪氨酸磷酸酶抑制剂正钒酸钠激活EGFR磷酸化后MTT检测细胞增殖情况、western blot检测细胞增殖分化相关蛋白及EMT相关蛋白表达情况。结果:为了研究GnRHR在胃癌中的作用,我们通过RT-PCR及免疫组化分别检测48例胃癌组织及相应的癌旁组织中GnRHR mRNA及GnRHR蛋白表达,结果显示GnRHR mRNA在胃癌组织中表达明显高于癌旁组织(-10.06±1.28 vs-12.43±1.33,p0.05)。GnRHR蛋白主要定位在细胞浆,在48例胃癌患者中,超过一半胃癌组织中GnRHR染色阴性(52.08%,25/48)。为了探讨GnRHR与胃癌患者临床参数及预后的相关性,我们收集48例胃癌患者临床及随访资料,采用统计学软件分析发现:GnRHR mRNA表达与肿瘤淋巴结转移、远处转移以及TNM分期有关;GnRHR mRNA表达与患者总生存率相关,并且GnRHR mRNA低表达(-ΔCt-10.06)患者总生存率较差(p=0.003;HR=0.42,95%CI:0.22-0.87)。按肿瘤分化程度将48例胃癌患者肿瘤组织标本分为分化差、分化良好两组,各种不同分化的癌组织均显示不同程度的GnRHR和EGFR阳性免疫反应,GnRHR表达阳性23例(47.92%),EGFR表达阳性26例(54.16%),原位定量显示GnRHR的表达分化良好20例、分化差3例,随着组织分化程度增高而增高,EGFR的表达分化良好13例、分化差13例,随着组织分化程度增高而降低(P0.05)。相关性分析显示:不同分化程度胃癌组织中GnRHR与EGFR表达成负相关并具有统计学意义;为了进一步探讨GnRHR与EGFR的相关性以及GnRHR在胃癌的发生发展、分化及侵袭转移中的作用及相关分子机制,我们通过细胞学实验从细胞增殖、细胞分化、细胞侵袭转移三方面进行研究。结果显示:不同浓度醋酸曲普瑞林作用胃癌细胞不同时间抑制胃癌细胞增殖,western blot结果显示GnRHR通过EGFR-ERK通路抑制胃癌细胞增殖;此外,GnRHR在不同分化程度胃癌细胞中表达不同,分化程度越高,GnRHR表达越高,进一步western blot结果显示GnRHR通过EGFR-CDK1通路调控胃癌细胞分化;胃癌组织中GnRHR与肿瘤转移相关,为了从细胞水平研究GnRHR对胃癌细胞侵袭转移的影响,采用醋酸曲普瑞林诱导GnRHR表达后transwell小室检测胃癌细胞迁移及侵袭能力,结果显示:醋酸曲普瑞林作用于胃癌细胞后,透膜细胞数明显减少。提示诱导GnRHR表达抑制胃癌细胞迁移及侵袭能力。进一步western blot结果显示GnRHR抑制磷酸化EGFR水平,进而抑制vimentin及snail蛋白水平,即GnRHR通过EGFR-EMT通路调控胃癌细胞侵袭转移。结论:GnRHR在胃癌组织中表达,其表达与肿瘤转移、TNM分期及患者预后有关。不同分化程度的胃癌组织中GnRHR及EGFR表达成一定的负相关。GnRHR通过调控EGFR在胃癌的发生发展、分化及侵袭转移中发挥作用。
[Abstract]:鐩殑:妫，
本文编号：2024668
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/zlx/2024668.html
