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miR-424-5p通过下调BCL-2的表达抑制人肺癌A549细胞增殖

发布时间:2018-06-20 02:15

  本文选题:microRNA--p + 肺癌 ; 参考:《中国生物化学与分子生物学报》2017年02期


【摘要】:microRNAs(miRNAs)是一类在真核生物中广泛存在的长度约为20~22个核苷酸的单链非编码小RNA,通过与其靶基因mRNA的3'非翻译区(3'UTR)结合发挥转录后抑制作用,参与调节细胞生长增殖、细胞代谢、细胞凋亡以及肿瘤的发生发展等过程。为研究microRNA-424-5p(miR-424-5p)在肺癌细胞中的作用及机理,利用lipo2000转染试剂将miR-424-5p mimics转染入人的非小细胞型肺癌细胞(NSCLC)A549中,流式细胞术检测A549细胞的周期变化及凋亡情况,发现细胞生长阻滞于G1/G0期且凋亡率显著上升。利用克隆形成实验和CCK-8法分别检测,发现miR-424-5p导致A549细胞增殖能力及活力降低。用在线数据库预测出抗凋亡基因BCL-2可能是miR-424-5p的靶基因,随后扩增BCL-2 mRNA的3'UTR,采用双荧光素酶报告实验及Western印迹检测证明BCL-2确为miR-424-5p的靶基因。构建BCL-2的真核表达载体p CMV-HA-BCL-2,与空载分别转染A549细胞后发现过表达BCL-2可抵消miR-424-5p引起的细胞周期阻滞及细胞凋亡。以上结果提示,miR-424-5p可以通过下调BCL-2的表达来抑制肺癌细胞增殖。
[Abstract]:MicroRNAs-miRNAs-) is a class of single-stranded non-coding RNAs with a length of about 20 ~ 22 nucleotides widely present in eukaryotes. It acts as a posttranscriptional inhibitor by binding to the 3'untranslated region of its target gene mRNA and participates in the regulation of cell growth, proliferation and cell metabolism. Apoptosis and tumor development and other processes. In order to study the role and mechanism of microRNA-424-5pmmiR-424-5p) in lung cancer cells, lipo2000 transfection reagent was used to transfect miR-424-5p mimics into human non-small cell lung cancer cell line NSCLCA549. Flow cytometry was used to detect the cell cycle changes and apoptosis of A549 cells. It was found that cell growth was blocked at G 1 / G 0 phase and apoptosis rate increased significantly. By using clone formation assay and CCK-8 assay, it was found that miR-424-5p induced the decrease of proliferation ability and activity of A549 cells. The anti-apoptotic gene BCL-2 was predicted to be the target gene of miR-424-5p by on-line database, then the 3UTRs of BCL-2 mRNA were amplified. The results of double luciferase report and Western blotting showed that BCL-2 was the target gene of miR-424-5p. The eukaryotic expression vector pCMV-HA-BCL-2 of BCL-2 was constructed and transfected into A549 cells respectively. It was found that overexpression of BCL-2 could counteract the cell cycle arrest and apoptosis induced by miR-424-5p. These results suggest that miR-424-5p can inhibit the proliferation of lung cancer cells by down-regulating the expression of BCL-2.
【作者单位】: 西北农林科技大学动物医学院;
【基金】:国家自然科学基金重点项目(No.31530075)资助~~
【分类号】:R734.2

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本文编号:2042463

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