DAB2IP对胰腺癌生长、转移及化疗耐药的作用及机制研究

发布时间：2018-06-21 16:11

本文选题：胰腺癌 + DAB2IP　；参考：《华中科技大学》2016年博士论文

【摘要】：目的：胰腺癌作为转移侵袭能力极强、致死率极高的肿瘤,患者的预后往往不佳。DAB2IP作为一种RasGAP蛋白家族成员之一,在多种肿瘤中证明其发挥抑癌基因的作用。本研究旨在探讨DAB2IP对胰腺癌生长、转移及化疗抗性的作用及机制,从而为治疗胰腺癌探索新的靶点。方法：1.探讨DAB2IP影响胰腺癌生长能力的体内外研究：首先,临床胰腺癌标本中分析DAB2IP表达的差异及与临床病理学资料的相关性,重点分析其与胰腺癌预后的关系；然后,利用胰腺癌内源性表达DAB2IP不同的细胞系分别转染过表达及低表达质粒,构建稳定高、低表达DAB2IP的细胞；其次,分别应用细胞增殖、凋亡实验、平板克隆及软琼脂克隆实验证明其对胰腺癌细胞体外生长的作用；最后,利用胰腺癌皮下移植瘤模型,分析DAB2IP对肿瘤生长的影响,并分析其可能的机制。2.探讨DAB2IP影响胰腺癌转移能力的体内外研究：首先,我们应用构建好的DAB2IP稳定高/低表达细胞系,利用划痕实验、Transwell侵袭迁移实验检测细胞体外转移能力的改变；然后,分别利用Western-blot和PCR技术检测EMT相关蛋白及相关转录因子的变化；其次,分析DAB2IP对调控转移的关键信号通路的作用：最后,利用尾静脉注射胰腺癌细胞建立的肺转移模型,分析DAB2IP对肿瘤体内转移情况的影响。3.探讨DAB2IP对胰腺癌化疗敏感性的研究：首先,检测常规一线化疗药物吉西他滨在胰腺癌中的IC50,以此浓度作用于上述两组稳定株细胞,检测细胞活力的改变分析DAB2IP是否增强胰腺癌对吉西他滨药物的敏感性；其次,我们检测新型化疗药物盐霉素的IC50,同样作用于上述两种稳定株细胞分析DAB2IP与盐霉素对胰腺癌细胞的活力的影响；然后,我们利用Realtime-PCR检测DAB2IP与化疗多重耐药相关基因的作用；最后,我们利用Western-blot分析DAB2IP对胰腺癌干细胞相关标记分子的影响。结果：1.DAB2IP抑制胰腺癌体内外生长情况：①利用免疫组化分析96例胰腺癌患者标本中DAB2IP的表达情况显示,胰腺癌组织中DAB2IP的表达明显低于癌旁组织；124例胰腺癌患者临床标本中DAB2IP的表达与肿瘤的病理分级、淋巴结转移的有无存在明显的相关性：我们进一步首次分析99例胰腺癌患者预后与DAB2IP表达的关系后发现,DAB2IP的表达缺失是胰腺癌预后较差的重要预测因子。②检测胰腺癌细胞检测内源性DAB2IP表达情况,转染已有DAB2IP干扰质粒及过表达质粒构建稳定改变DAB2IP表达的细胞,发现DAB2IP可以抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,同时DAB2IP可以抑制细胞贴壁性及非贴壁性克隆的形成能力。③建立胰腺癌皮下移植瘤模型,发现DAB2IP可以抑制胰腺癌细胞体内生长,其可能是通过诱导肿瘤组织细胞凋亡、抑制增殖来实现的。2.DAB2IP对胰腺癌体内外转移情况的影响：①细胞划痕、Trans well侵袭迁移实验显示,DAB2IP可以抑制胰腺癌细胞体外迁移和侵袭能力。②WB实验提示DAB2IP在胰腺癌可能通过抑制EMT的过程发挥抑制转移的功能的,并与转录因子Slug表达改变密切相关：Luciferase实验进一步验证了DAB2IP可以抑制Slug的转录活性。③检测调控EMT发生的重要信号通路关键蛋白表达发现,DAB2IP可以抑制STAT3、Akt的激活,并首次发现其可以抑制Smad2/3的磷酸化水平继而参与TGF-β信号通路的调控。3.DAB2IP对胰腺癌化疗敏感性的作用：①发现DAB2IP可以抑制胰腺癌细胞对一线化疗药物的吉西他滨的抗性,也可以协同促进对新型化疗药物盐霉素对胰腺癌细胞的敏感性。②DAB2IP可以抑制多重耐药相关基因特别是ABCC1基因的表达。③DAB2IP可以抑制胰腺癌干性标记分子,特别是CD133蛋白的表达。结论：DAB2IP作为一种肿瘤抑制基因,分别通过抑制胰腺癌的生长、转移、化疗抗性等方面发挥作用,其可能与抑制Slug的转录或激活、ABCC1等耐药基因、CD133等干性基因的表达有关,可以为未来临床治疗胰腺癌提出新的思路。
[Abstract]:Objective : To investigate the role and mechanism in the treatment of pancreatic cancer with pancreatic cancer as one of the members of a family of RasGAP protein . The aim of this study was to investigate the effect and mechanism of the gene on growth , metastasis and chemotherapy resistance of pancreatic cancer .
then , the cell lines with different expression and low expression plasmids are respectively transfected with different cell lines of the endogenous expression of the pancreatic cancer , so that the cells with high stability and low expression are constructed ;
Secondly , cell proliferation , apoptosis experiment , plate cloning and soft agar cloning were used to prove its effect on the growth of pancreatic cancer cells in vitro .
Finally , by using the model of subcutaneous transplantation of pancreatic cancer , the influence on tumor growth was analyzed and the possible mechanism was analyzed .
Then , the changes of EMT - related protein and related transcription factors were detected by Western - blot and PCR .
Secondly , the key signal pathway for the control and metastasis of pancreatic cancer was analyzed by analyzing the influence on the metastasis of pancreatic cancer by using the model of lung metastasis established by the tail vein injection of pancreatic cancer .
Secondly , we tested the IC50 of the new chemotherapeutic drug salt , which was also applied to the analysis of the effects of the above two stable cell lines on the viability of pancreatic cancer cells .
Then , we used Realtime - PCR to detect the effect of multi - drug resistance related genes in vitro .
Finally , we used Western - blot to analyze the effect of the on - vitro growth of pancreatic cancer stem cells . Results : 1 . The growth of pancreatic cancer cells was inhibited by 1 . 2 IP .
In this paper , we can inhibit the proliferation of pancreatic cancer cells and inhibit the proliferation of pancreatic cancer cells .
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9

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