NAMPT基因多态性与食管鳞癌发生风险的相关性研究

发布时间：2018-06-27 15:27

  本文选题：食管鳞状细胞癌 + 尼克酰胺磷酸核糖转移酶　； 参考：《山东大学》2015年博士论文

【摘要】：研究背景在世界范围内,食管癌的发病率、死亡率均较高,而我国正是食管癌高发区之一。因为早期临床表现不典型,发现时多已进入中晚期,生存期短,生活质量差；但如果发现及时,内镜下微创治疗是可以根治的。因此早发现、早诊断对于食管癌的高危人群和患者尤为重要。另外,如果针对发病机制某一关键环节加以合理、有效的干预,或许能显著降低高危人群的患病风险,甚至是食管癌治疗方法的一个巨大突破。但目前,食管癌发病机制尚不明确,环境、不健康的生活方式(如热食、吸烟、酗酒、口腔卫生等)、人类乳头瘤病毒感染等均可能影响食管癌的发生,除此之外,遗传易感性也是研究热点之一。单核苷酸多态性(SNPs)可通过影响蛋白质的结构或表达,间接提高或降低疾病的遗传易感性。另外,由多个SNP位点构建的单倍型,因为整合了多个位点之间连锁不平衡的信息,更能有效地体现基因多态性与疾病遗传易感性的相关性。从分子细胞学角度看,肿瘤的发生、发展,包括食管癌,是致癌物代谢激活与灭活、DNA损伤与修复、细胞增殖与凋亡等多方面综合作用的结果。现已提出,有关致癌物代谢基因、DNA修复基因、细胞周期控制基因和叶酸代谢基因的基因多态性可能与食管癌的发生、发展相关。本研究所涉及的基因是尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT),同时称为前B细胞克隆增强因子(PBEF)或内脏脂肪素,其表达的蛋白质Nampt具有高度同源的氨基酸序列。首先它在尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)生物合成过程中起限速酶作用；而后者参与基因转录调节、DNA修复、细胞周期、凋亡、钙离子的平衡、端粒酶的活性、抗氧化、能量代谢、昼夜节律的维护以及染色质的动态调节,并是基因稳定性、机体代谢平衡的重要调节因子。另外,它有两种存在方式,细胞内的(iNampt)和细胞外的(eNampt)。iNampt通过激活细胞信号调节蛋白激酶(ERK)1/2通路,促进血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶(MMP)2/9的生成,对血管形成有重要的促进作用。同时,iNampt参与淋巴细胞成熟和分化,eNampt则可诱导促炎性细胞因子、趋化因子的积极表达,由此两者共同促进炎症发生。此外,Nampt作为一种新发现的脂肪因子,具有模拟胰岛素功能,可能与肿瘤的发生有关。而多个研究也证实,多种肿瘤患者iNampt和eNampt较健康人群明显升高,且表达水平与胃癌、恶性形细胞胶质瘤等肿瘤的恶性程度成正比。所以,我们有理由认为,Nampt可能成为针对恶性肿瘤的一种很好的生物标志物。基因NAMPT本身相对较保守,微小的突变就可能导致蛋白质结构或功能发生巨大改变,甚至影响疾病的发生发展,例如膀胱癌、肥胖、急性肺损伤等。rs61330082位于启动子,该元件可与转录因子结合,启动转录开始,并有起始特异性。3’端非翻译区有多个TATA基序,为细胞分泌所需要,rs2505568和rs9034则位于该处。因此,这3个SNP位点的突变均可能会影响Nampt蛋白质表达,甚至可能通过上述途径影响肿瘤的遗传易感性。目的河南省安阳市是中国食管癌的高发区之一,通过病例-对照研究,探讨NAMPT的3个SNP位点rs61330082、rs2505568和rs9034基因多态性,以及相关的单倍型是否与食管鳞状细胞癌(ESCC)的发生发展密切相关。方法在2005年2月至2011年7月期间,来自于河南省安阳肿瘤医院的405例ESCC患者作为病例组,随机选择405例来自于同地区、同时期的、无血缘关系、无肿瘤或自身免疫性疾病的健康者作为对照组,并与病例组在性别、年龄(±1年)方面1：1匹配。研究对象签署知情同意书后,抽血、提取DNA。聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)用来检测NAMPT的3个SNP位点,即rs61330082、rs2505568和rs9034的基因型,并随机选择其中10%的PCR产物进行DNA测序,核对确定的基因型是否准确。然后,PHASE 2.1软件构建单倍型,并估计其频率。通过STATA 11.2软件,利用卡方检验,分析每个位点的基因型频率分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律；运用Mann-Whitney U检验,分析两组人群的年龄是否存在分布差异；采用McNemar检验,分析两组人群的吸烟、饮酒情况是否有分布差异。在条件Logistic回归模型中,计算出校正了年龄、性别、吸烟和饮酒等混杂因素后的OR和95%CI,以此分析各位点的基因型、等位基因和单倍型与ESCC发病风险之间有无关联。结果NAMPT的3个SNP位点,即rs61330082、rs2505568和rs9034均具有基因多态性,且基因型分布情况均满足Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05)。在病例组中,rs61330082基因型CT、TT和等位基因T的分布频率均显著低于对照组(48.89% vs.53.33%,P0.01；18.52 vs.30.37%,P0.01；42.96% vs.57.04%,P0.01)；3种状态均能显著降低携带者发生ESCC的风险；反之,基因型CC、等位基因C可使人群ESCC的易感性显著升高。在rs2505568位点上,未发现基因型AA,在rs9034位点上,未发现基因型TT,这两个位点的余下两种基因型在两组中均无显著的分布差异。PHASE 2.1软件共构建出5种相关单倍型,而病例组的单倍型CTC、CTT或CAC的分布频率显著高于对照组(P0.01, OR=1.57,95% CI:1.16-2.12; P = 0.04, OR=1.72,95% CI:1.03-2.85; P0.01, OR= 3.39,95% CI:1.99-5.75)。结论在中国人群中,NAMP1基因rs61330082、rs2505568和rs9034均具有基因多态性。rs61330082基因型CC、等位基因C可能是ESCC遗传易感性的危险因素；而rs2505568、rs9034基因多态性与ESCC发病无明显相关性。单倍型CTC(rs61330082 C-rs2505568 T-rs9034 C)、CTT (rs61330082 C-rs2505568 T-rs9034 T)和CAC (rs61330082 C-rs2505568 A-rs9034 C)均可能增加个体罹患ESCC的风险。因此,NAMP1基因rs61330082多态性以及单倍型CTC、CTT和CAC可能成为筛选ESCC的高危人群的生物标志或基因治疗的靶点。
[Abstract]:Background In the world , the incidence and mortality of esophageal cancer are high , and our country is one of the high incidence areas of esophageal cancer . Because early clinical manifestation is not typical , it has entered the middle and late stage , the survival period is short , and the quality of life is poor ;
It is found that early diagnosis is especially important for high - risk populations and patients with esophageal cancer . In addition , genetic susceptibility is one of the hot topics .
It is suggested that Nampt may be a good biomarker for malignant tumors . Three SNP sites of NAMPT , rs61330082 , rs2505568 and rs9034 were randomly selected , and the genotypes of rs61330082 , rs2505568 and rs9034 were detected by PCR - RFLP .
Mann - Whitney U test was used to analyze the distribution difference between the two groups .
In the conditional logistic regression model , the OR and 95 % CIs were calculated for the patients with age , sex , smoking and alcohol consumption . The results showed that the polymorphism of genotype , allele and haplotype was significantly lower than that of the control group ( 48.89 % vs . 53.33 % , P0.01 ) .
18.52 vs.30.37%,P0.01锛，

本文编号：2074372