黄芪甲甙协同顺铂对非小细胞肺癌细胞敏感性的作用研究

发布时间：2018-07-01 16:32

  本文选题：非小细胞肺癌 + 黄芪甲甙　； 参考：《成都中医药大学》2016年博士论文

【摘要】：研究背景与目的：肺癌是世界上发病率最高的恶性肿瘤,化疗是治疗肺癌的主要手段之一,但过去25年其5年生存率仍未见显著提高,约为15%。而多药耐药(MDR)是肺癌化疗失败的主要原因之一。在肺癌化疗中,顺铂(DDP)是有效并广泛应用的一线药物,是一种细胞周期非特异性的细胞毒药物。目前认为抗癌细胞凋亡、损伤修复过程中DNA剪切物的增加、与调控信号通路相关的调节蛋白表达的改变、药物摄取减少导致细胞内CDDP浓度降低等均可能与顺铂的耐药有关,然而肺癌细胞对其耐药的机制尚未完全阐明。Ras基因位于PI3K/AKT通路的上游,而PI3K/AKT通路是最主要的抗凋亡通路。研究发现AKT1的过表达和基因扩增与肺癌细胞对顺铂耐药密切相关,抑制AKT1的表达可以逆转顺铂的耐药。研究发现B7-H3在多种恶性肿瘤中呈高表达,因而受到越来越多的关注,研究发现B7-H3是通过某些机制参与调节了肿瘤促凋亡或抗凋亡的基因,认为有可能成为某些肿瘤的新诊断标志物和潜在治疗靶点。黄芪甲甙(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)是黄芪的主要成分之一。研究表明,AS-IV可以通过调节性T细胞和细胞毒性T淋巴细胞以及PKC-α-ERK1/2-NF-κB信号传导途径抑制肺癌细胞的迁移和侵袭。研究目的是(1)通过比较黄芪口服液辅助化疗和常规化疗治疗老年肺癌患者的疗效及对免疫功能的影响,以期为黄芪口服液辅助化疗治疗老年肺癌提供一定的临床依据；(2)研究通过检测B7-H3在肺癌细胞系中的表达,分析B7-H3对肺癌细胞系的影响；(3)CCK-8评估不同浓度黄芪甲甙联合顺铂作用于A549/DDP细胞, 观察A549/DDP细胞增殖影响；(4)CCK-8法检测siRNAB7-H3后,黄芪甲甙联合顺铂对细胞增殖的影响；(5)探讨在耐药的肺癌细胞中B7-H3与Ras/AKT信号通路之间相互作用。研究方法：1、通过比较黄芪口服液辅助化疗和常规化疗治疗老年肺癌患者RR、DCR和生产率的比较,及外周血中CD3+、CD4+、CD8+及NK淋巴细胞变化；2、利用免疫组化法检测NSCLC肿瘤组织、癌旁组织及良性病变组织中B7-H3的表达量,并收集患者临床资料,分析B7-H3与临床参数的关系；qRT-PCR和蛋白印迹法测定不同肺癌细胞系中B7-H3的变化；3、CCK-8法评估AS-Ⅳ对A549、A549/DDP增殖抑制情况；评估顺铂耐药倍数及毒性剂量；以及AS-Ⅳ与顺铂的最佳联合剂量；4.siRNAB7-H3后,AS-IV、顺铂及联合干预A549/DDP细胞后增殖抑制情况；5、药物干预不同细胞组后,蛋白印迹法B7-H3、Ras、pAKT1蛋白的变化。研究结果：1、结果显示,两组患者的RR、DCR相比,均无显著性差异(P0.05)。实验组患者6个月、12个月及18个月的生存率均明显高于对照组,具有显著性差异(P0.05)。实验组CD3+、CD4+、CD8+、及NK细胞的活性比对照组明显增高,具有显著性差异(P0.05)。2、研究发现B7-H3在A549及SPAC-1中表达较低,在H466、H1299及H460中表达较高。免疫组化检测NSCLC患者组织发现,B7-H3表达于细胞膜或胞浆内或两者内均有表达。B7-H3阳性表达率在肺癌组织中高于良性病变组织和癌旁组织,良性病变组织较癌旁组织表达量高。B7-H3的表达强度与分化程度、淋巴结转移密切相关,可能与非小细胞肺癌进展相关；3、本实验人肺腺癌A549经不同浓度AS-Ⅳ干预48h后,细胞增殖抑制率随着AS-Ⅳ浓度的增高,A549细胞的增殖抑制率升高；A549/DDP经不同浓度AS-Ⅳ干预48h后,细胞增殖抑制率随着AS-Ⅳ浓度的增高,12ng/ml、24ng/ml与对照组比较,统计有意义,P0.01；DDP耐药倍数为14.14倍,细胞高度耐药；12ng/mlAS-IV联合DDPO.625 ug/mL,协同效果最好；4、B7-H3表达下调抑制了A549/DDP细胞增殖；4、B7-H3表达下调联合AS-Ⅳ、DDP非常显著的抑制了A549/DDP细胞增殖；5、抑制B7-H3联合AS-Ⅳ作用后B7-H3、Ras、pAKT1表达下降最明显,提示AS-Ⅳ可能抑制B7-H3并通过B7-H3/Ras/pAKT1/,抑制细胞的抗凋亡,使其产生增敏作用。结论：研究表明,1、黄芪联合化疗可以提高临床疗效,可以升高淋巴细胞数量；2、B7-H3在NSCLC组织及肺癌细胞中的表达上升；3、AS-Ⅳ对肺癌细胞有抑制作用,呈现浓度趋势；4、AS-Ⅳ联合顺铂可增加肿瘤细胞抑制率；5、抑制B7-H3可以抑制Ras/pAKT1的活化；6、AS-Ⅳ可通过下调B7-H3,抑制Ras/pAKT1活化,促进了顺铂的化疗敏感性。
[Abstract]:In the past 25 years , cisplatin ( DDP ) is an effective and widely used first - line drug , which is one of the main causes of lung cancer chemotherapy .
( 2 ) To study the expression of B7 - H3 in lung cancer cell line and to analyze the effect of B7 - H3 on lung cancer cell line .
( 3 ) CCK - 8 was used to evaluate the effect of astragalus administration with cisplatin on A549 / DDP cells and to observe the proliferation of A549 / DDP cells .
( 4 ) CCK - 8 method was used to detect the effect of siRNAB7 - H3 on cell proliferation after siRNAB7 - H3 .
( 5 ) To investigate the interaction between B7 - H3 and Ras / T signaling pathway in drug - resistant lung cancer cells . Methods : 1 . To compare the ratio of RR , DCR and productivity in elderly patients with lung cancer by comparing the adjuvant chemotherapy with conventional chemotherapy and conventional chemotherapy , and the changes of CD3 + , CD4 + , CD8 + and NK lymphocytes in peripheral blood .
2 . The expression of B7 - H3 in NSCLC tumor tissues , adjacent tissues and benign lesions was detected by immunohistochemistry , and the clinical data of patients were collected , and the relationship between B7 - H3 and clinical parameters was analyzed .
Quantitative Analysis of B7 - H3 in Different Lung Cancer Cell Lines by qRT - PCR and Western Blotting
3 銆，

本文编号：2088385