MiR-218通过抑制Robo1的表达影响肺癌细胞迁移侵袭

发布时间：2018-08-26 20:40

【摘要】：背景与目的本研究旨在探讨肺癌中miR-218的表达,研究miR-218在肺癌细胞中的功能及其可能的分子机制。方法应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测15例肺癌组织和15例癌旁组织中miR-218的表达。在肺癌细胞A549中转染miR-218的抑制物(Anti-miR-218),在肺癌细胞HCC4006中转染miR-218的模拟物后,用Transwell实验检测细胞的迁移侵袭能力的变化。用Targetscan和MiRanda软件预测miR-218的可能靶点,转染miR-218的抑制物及模拟物后用qRT-PCR和Western blot检测Robo1的mRNA和蛋白表达水平。用双荧光素酶报告基因方法鉴定miR-218和Robo1的调控关系。用Anti-miR-218、miR-218模拟物或阴性对照与Si-Robo1或Si-NC同时转染细胞,应用Transwell实验检测转染后细胞的侵袭迁移能力的变化。结果与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-218在肺癌组织中表达水平显著降低(P0.01)。在A549细胞中转染miR-218的抑制物,能够显著降低miR-218的表达,促进了细胞的迁移侵袭。在HCC4006中转染miR-218的模拟物能够显著提高miR-218的表达,同时抑制了细胞的迁移侵袭能力。利用生物信息学预测出在Robo1的3′UTR区有miR-218的结合位点,双荧光素酶报告基因实验进一步证实miR-218能够调控Robo1的转录活性。抑制miR-218能够提高Robo1的表达;过表达miR-218显著降低Robo1的表达,且miR-218能够通过调控Robo1影响细胞的迁移侵袭。结论 MiR-218在肺癌组织中呈现低表达状态,miR-218可能是通过抑制Robo1的表达抑制肺癌细胞侵袭迁移。
[Abstract]:Background & AIM this study aims to investigate the expression of miR-218 in lung cancer and the function of miR-218 in lung cancer cells and its possible molecular mechanism. Methods Real-time quantitative PCR (qRT-PCR) was used to detect the expression of miR-218 in 15 lung cancer tissues and 15 paracancerous tissues. After transfection of miR-218 inhibitor (Anti-miR-218) into lung cancer cell line A549 and HCC4006 of lung cancer cell, the changes of cell migration and invasion ability were detected by Transwell assay. The possible targets of miR-218 were predicted by Targetscan and MiRanda software. The mRNA and protein expression levels of Robo1 were detected by qRT-PCR and Western blot after transfection of miR-218 inhibitors and mimics. The regulatory relationship between miR-218 and Robo1 was identified by double luciferase reporter gene method. Anti-miR-218,miR-218 analogue or negative control was used to transfect the cells simultaneously with Si-Robo1 or Si-NC. The changes of invasion and migration ability of transfected cells were detected by Transwell assay. Results the expression of miR-218 in lung cancer tissues was significantly lower than that in adjacent tissues (P0.01). Transfection of miR-218 inhibitor in A549 cells significantly reduced the expression of miR-218 and promoted the migration and invasion of A549 cells. The mimics transfected with miR-218 in HCC4006 could significantly increase the expression of miR-218 and inhibit the ability of cell migration and invasion. The binding sites of miR-218 in the 3'UTR region of Robo1 were predicted by bioinformatics. The double luciferase reporter gene experiment further confirmed that miR-218 could regulate the transcriptional activity of Robo1. Inhibition of miR-218 could increase the expression of Robo1, overexpression of miR-218 significantly decreased the expression of Robo1, and miR-218 could influence the migration and invasion of cells by regulating Robo1. Conclusion the low expression of MiR-218 in lung cancer tissues may inhibit the invasion and migration of lung cancer cells by inhibiting the expression of Robo1.
【作者单位】： 解放军总医院第一附属医院;
【分类号】：R734.2

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