肝癌HepG2细胞分泌的Exosome对间充质干细胞分化的影响及其相互作用机制

发布时间：2018-08-29 18:58

【摘要】：目的评估肝癌HepG2细胞分泌的Exosome对间充质干细胞(MSC)分化为肿瘤相关成纤维细胞(CAF)的影响及其相互作用机制。方法在人脂肪MSC培养体系中加入HepG2细胞分泌的Exosome进行培养,采用Western blot法检测CAF特征性蛋白的表达情况。将已鉴定为CAF样条件培养基(CAF-CM)和牛血清白蛋白对照组分别加至HepG2培养基中,采用Western blot法和定量PCR检测上皮间质转化相关基因的表达,MTS法检测细胞增殖,Transwell法检测HepG2细胞的迁移和侵袭。结果 HepG2细胞分泌的Exosome表达CD63、热休克蛋白(HSP)70和HSP90。将Exosome加入MSC培养体系后14 d,可检测到α平滑肌肌动蛋白、成纤维细胞激活蛋白α、白细胞介素(IL)-6、IL-8和IL-1β等CAF特征性蛋白的表达。MTS法检测CAF-CM组的细胞增殖OD值为1.075±0.104,明显高于对照组的0.874±0.066(P=0.023)和MSC条件培养基组的0.649±0.034(P=0.0005)。CAF-CM组迁移的HepG2细胞数为(42.5±9.1)个,明显高于对照组的(18.5±3.1)个(P=0.001);CAF-CM组侵袭细胞数为(29.0±3.5)个,明显高于对照组的(13.1±3.7)个(P=0.009)。CAF-CM组Smad交互蛋白1(P=0.040)、β-catenin(P=0.038)、纤连蛋白(P=0.029)和Vimentin(P=0.013)的表达较对照组显著上调;而CAF-CM组的紧密连接蛋白表达显著低于对照组(P=0.010)。结论肝癌HepG2细胞系分泌的Exosome可诱导脂肪组织来源的MSC分化为CAF,后者又可以促进HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭。
[Abstract]:Objective to evaluate the effect of Exosome secreted by hepatocellular carcinoma (HepG2) cells on the differentiation of mesenchymal stem cells (MSC) into tumor-associated fibroblasts (CAF) and its interaction mechanism. Methods Exosome secreted by HepG2 cells was added to human adipose MSC culture system and the expression of CAF characteristic protein was detected by Western blot assay. CAF like conditioned medium (CAF-CM) and bovine serum albumin (BSA) control group were added to HepG2 medium, respectively. The expression of genes associated with epithelial mesenchymal transformation was detected by Western blot and quantitative PCR. The migration and invasion of HepG2 cells were detected by cell proliferation and transwell assay. Results Exosome secreted by HepG2 cells expressed CD63, heat shock protein (HSP) 70 and HSP90.. 伪 -smooth muscle actin was detected 14 days after Exosome was added to MSC culture system. The expression of fibroblast activator protein 伪, interleukin (IL) 6, IL-8 and IL-1 尾 in the CAF-CM group was 1.075 卤0.104, which was significantly higher than that in the control group (0.874 卤0.066) and MSC conditioned medium group (0.649 卤0.034 (P0. 0005). CAF-CM group was (42. 5 卤9. 1). The number of invasive cells in CAF-CM group was significantly higher than that in control group (18.5 卤3.1) (29.0 卤3.5), significantly higher than that in control group (13.1 卤3.7) (P0. 009). The expression of 尾 -catenin (P0. 040), 尾-catenin (P0. 038), fibronectin (P0. 029) and Vimentin (P0. 013) in CAF-CM group were significantly higher than those in control group. The expression of tight junction protein in CAF-CM group was significantly lower than that in control group (P0. 010). Conclusion Exosome secreted by HepG2 cell line can induce MSC derived from adipose tissue to differentiate into CAF, which can promote proliferation, migration and invasion of HepG2 cells.
【作者单位】： 中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院肿瘤内科;中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心;
【基金】：国家自然科学基金(81472785、61435001)~~
【分类号】：R735.7

【参考文献】

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本文编号：2212109