抗IL-4与IL-13主动免疫对小鼠移植肿瘤生长及治疗性HPV疫苗作用的影响

发布时间：2018-10-05 16:56

【摘要】：[背景]Th2细胞及其产生的细胞因子在肿瘤发生发展过程中发挥着重要作用。IL-4、IL-13能够刺激巨噬细胞向M2型分化并表达IL-10、TGF-β1与arginase-1等抑制因子以及VEGF、EGF等促肿瘤血管生成因子;此外,其促进Tregs和MDSCs的分化及向肿瘤的趋化浸润,抑制T细胞介导的细胞毒作用等抗肿瘤免疫效应。因此,靶向调控IL-4、IL-13功能,具有下调Th2、Treg、MDSCs及肿瘤相关巨噬细胞等免疫抑制细胞应答,增强CTLs/Th1效应细胞应答的潜力。[目的]揭示抗IL-4、IL-13主动免疫持续干预肿瘤微环境Th2应答对肿瘤生长与抗肿瘤免疫,以及对肿瘤抗原特异治疗性疫苗作用发挥的影响,探讨其中的免疫效应机制,为肿瘤免疫干预治疗提供可能的有效手段和策略。[方法]以基因重组技术构建呈现IL-4、IL-13抗原表位的乙肝核心抗原(HBcAg)病毒样颗粒(VLPs)疫苗;经TC-1肿瘤细胞皮下移植C57小鼠,建立HPV感染引起肿瘤的小鼠模型;在肿瘤模型中,首先以预防性策略进行抗IL-4、IL-13 疫苗免疫, 考察诱导的特异抗体对随后 TC-1 移植肿瘤生长及小 鼠抗肿瘤免疫应答的影响;然后以治疗性策略进行抗细胞因子主动免疫单独或联合肿瘤抗原特异治疗性HPV疫苗免疫,考察肿瘤微环境建立后,抗IL-4、IL-13免疫是否仍能影响肿瘤生长,以及对肿瘤抗原特异的治疗性疫苗的作用发挥有影响。具体操作是,先对C57小鼠进行TC-I肿瘤细胞接种,当肿瘤长至1-2mmm直径时,进行抗IL-4、IL-13疫苗免疫,当肿瘤生长至5-6mm直径时,再进行抗原特异的治疗性HPV疫苗免疫干预。动物模型研究实验内容包括:每两到三天测量记录肿瘤大小;在实验终点,以流式细胞术分析免疫细胞(如Th1、Th2、Tregs和CTLs)的应答水平与功能状态,以ELISPOT分析抗原特异的表达IFN- γ或IL-4的脾细胞应答,以ELISA检测血清及脾细胞培养上清中IFN- γ,IL-4和IL-13表达。[结果]重组蛋白在大肠杆菌中获得高效表达,纯化后的蛋白主要以VLPs形式存在。抗IL-4、IL-13 VLPs疫苗免疫小鼠激发了高水平的特异抗体应答。在预防性免疫研究中,抗IL-4、IL-13疫苗显著抑制小鼠肿瘤生长;ELISOPT结果显示疫苗免疫显著促进HPV16 E7抗原特异的表达IFN-γ的脾细胞应答水平,而下调了表达IL-4的脾细胞水平;疫苗免疫小鼠血清及脾细胞培养上清中IL-4、IL-13水平显著降低,而IFN-γ表达水平显著提高;流式分析显示,疫苗显著抑制了Th2、Tregs细胞水平而增强了Th1细胞水平,此外,肿瘤抗原特异CTLs水平也显著增强。在治疗性免疫干预研究中,单独抗IL-4、IL-13主动免疫同样表现出对肿瘤生长的显著抑制,ELISA分析显示小鼠血清中IFN-γ表达水平增高,同时流式分析显示脾细胞中的Th1与CTLs细胞水平提高而抑制了 Tregs细胞的水平。进一步的,当抗IL-4、IL-13疫苗与治疗性HPV疫苗联合免疫时,显示了显著的协同作用,即更显著的肿瘤生长抑制,以及Th1/CTLs效应细胞应答增强及Tregs应答减弱。[结论]靶向IL-4和IL-13的疫苗主动免疫可诱导高水平的、持续存在的特异抗体应答,显著抑制小鼠肿瘤的生长,且对肿瘤抗原特异治疗性疫苗的抗肿瘤作用具有协调作用。研究揭示抗IL-4、IL-13主动免疫是潜在的肿瘤免疫干预新策略,并提供了可能的有效干预手段。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R730.51

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本文编号：2254154