PKM2在白血病NB4细胞系的分布及对c-Myc蛋白的影响

发布时间：2018-10-11 13:07

【摘要】：探讨PKM2在白血病NB4细胞中的分布情况及对c-Myc蛋白的影响。免疫荧光技术检测PKM2在NB4细胞中的分布情况。将含靶点序列的GV248载体、包装质粒Helper 1.0和Helper 2.0共转染293T细胞,包装慢病毒。收集病毒上清,浓缩纯化后感染NB4细胞,荧光显微镜观察感染效率,Western blotting检测PKM2和c-Myc蛋白的表达变化。CCK-8实验检测细胞增殖情况。结果显示,PKM2在NB4细胞核及细胞质中均有表达,细胞核中比例较大。成功构建LV-PKM2-RNAi病毒,感染的细胞PKM2和c-Myc表达下调(p0.05),细胞增殖能力降低(p0.05)。这些结果表明PKM2主要分布在NB4细胞核,抑制PKM2表达可明显抑制NB4细胞增殖,并抑制c-Myc蛋白表达。
[Abstract]:To investigate the distribution of PKM2 in leukemic NB4 cells and its effect on c-Myc protein. The distribution of PKM2 in NB4 cells was detected by immunofluorescence technique. The GV248 vector containing target sequence was cotransfected into 293T cells with packaging plasmids Helper 1.0 and Helper 2.0 to package lentivirus. The virus supernatant was collected and then infected with NB4 cells after concentrated and purified. The expression of PKM2 and c-Myc protein was detected by fluorescence microscopy by, Western blotting and the proliferation of cells was detected by CCK-8 assay. The results showed that PKM2 was expressed in the nucleus and cytoplasm of NB4. LV-PKM2-RNAi virus was successfully constructed. The expression of PKM2 and c-Myc was down-regulated (p0.05) and the cell proliferation was decreased (p0.05). These results suggest that PKM2 is mainly distributed in the nucleus of NB4. Inhibiting the expression of PKM2 can significantly inhibit the proliferation of NB4 cells and inhibit the expression of c-Myc protein.
【作者单位】： 重庆医科大学附属永川医院中心实验室 重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室
【基金】：国家自然科学基金(81171658) 重庆市自然科学基金(2011BA5037)共同资助
【分类号】：R733.7

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本文编号：2264302