白细胞介素27对胰腺癌细胞生物学行为的影响及机制研究

发布时间：2018-10-25 12:36

【摘要】：研究背景及目的胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,起病隐匿,发病迅速,预后极差,除早期手术治疗外,其他治疗方法收效甚微。肿瘤的生物治疗是肿瘤治疗的新趋势,同时也是胰腺癌综合诊治的研究热点。研究开发能够激活宿主的天然免疫防御机制或直接使用天然或基因工程产生的靶向药物是生物治疗的核心。白细胞介素27(Interleukin-27, IL-27)是来源于IL-6/IL-12细胞因子家族的异源二聚体细胞因子,其对不同类型的免疫细胞具有广泛调节作用。研究发现IL-27不仅可以通过调节免疫应答产生抗肿瘤作用,并具有直接杀伤肿瘤细胞的功能。IL-27对于机体的免疫功能具有调节作用,可以作为潜在的肿瘤免疫治疗因子,然而关于IL-27对于胰腺癌的相关作用研究甚少。为了更好的了解IL-27的生物学功能及其对胰腺癌细胞的作用,本研究拟通过探讨IL-27对胰腺癌细胞恶性生物学行为可能存在的直接和间接的影响以及可能的作用机制,为IL-27可能成为胰腺癌生物治疗新靶点提供理论及实验依据。研究内容一、检测IL-27对多株胰腺癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭能力的影响。二、建立巨噬细胞、胰腺癌细胞共培养体系,检测IL-27是否能通过影响巨噬细胞干预胰腺癌细胞的生物学行为。研究方法一、利用Real-time PCR及Western blot技术检测多株胰腺癌细胞中IL-27特异性受体WSX-1的表达情况。IL-27直接作用于胰腺癌细胞后,CCK-8法检测胰腺癌细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,利用Transwell法检测胰腺癌的迁移、侵袭能力。二、采用PMA将人组织淋巴瘤细胞株U937细胞诱导为巨噬细胞(Mφ),流式细胞检测巨噬细胞标志物CD68分子的表达情况。采用IL-4将Mφφ诱导为M2型巨噬细胞,Real-time PCR检测M1型巨噬细胞标志物CD86、IL-12p40,M2犁巨噬细胞标志物CD206的表达情况,验证M2型巨噬细胞是否诱导成功。IL-27刺激M2型巨噬细胞,Real-time PCR检测CD86、IL-12p40、CD206的表达,观察IL-27对于M2型巨噬细胞表型的影响。建立M2型巨噬细胞/胰腺癌细胞共培养体系,加入IL-27进行刺激,CCK-8检测胰腺癌细胞增殖能力的变化,流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况,Western blot检测细胞周期及凋亡相关蛋白的变化。利用Transwell法检测胰腺癌的迁移、侵袭能力改变。Western blot检测侵袭相关蛋白,探索可能的作用机制。结果一、多株胰腺癌细胞内WSX-1的表达水平显著低于脾组织及U937细胞。IL-27对胰腺癌细胞的增殖能力、周期、凋亡、迁移及侵袭能力无明显的直接作用。二、PMA诱导的U937细胞经流式检测CD68分子的表达显著升高,说明巨噬细胞(Mφ)诱导成功。IL-4诱导Mφ为M2型巨噬细胞后,M2型巨噬细胞的CD86、IL-12p40显著低于Mφ,而CD206显著高于Mφ,提示M2型巨噬细胞诱导成功。M2型巨噬细胞的IL-27特异性受体WSX-1的表达水平也显著高于Mφ。IL-27刺激M2型巨噬细胞后,CD86、IL-12p40表达显著升高,CD206表达显著降低,提示IL-27可能诱导M2型巨噬细胞向M1型转化。在M2型巨噬细胞/胰腺癌细胞共培养体系中加入IL-27后,胰腺癌细胞的增殖能力、迁移及侵袭能力显著下降,吉西他滨诱导的细胞凋亡程度显著上升。Western blot显示,在共培养体系中加入IL-27后,胰腺癌细胞的细胞周期相关蛋白CDK4、CyclinD1表达下降,凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-9显著上调,侵袭转移相关蛋白p-STAT3, JAK2, vimentin显著下调。结论IL-27特异性受体WSX-1在胰腺癌细胞株内表达水平均较低,IL-27无明显的直接抑制胰腺癌细胞的作用。U937可以在体外诱导为巨噬细胞,利用共培养体系可以研究巨噬细胞与胰腺癌细胞的相互作用,IL-27可以在体外将M2型巨噬细胞向M1型转化,从而间接抑制胰腺癌细胞的恶性生物学行为。
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【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9
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本文编号：2293710