原发性肝癌围手术期肝移植患者外周血环状RNA的差异表达研究

发布时间：2018-11-14 16:19

【摘要】：肝脏是身体内极其重要的代谢器官,其功能的失调会影响机体正常的新陈代谢和内环境的变化。原发性肝癌(Primary Liver Cancer,PLC)是一类发生于肝脏的恶性肿瘤,一般由化学致癌物或环境因素引发的慢性肝病或肝硬化发展而来,但是目前发病机制还未阐明,病理诊断和治疗手段有一定的局限性。同种异体肝移植是目前治疗PLC最彻底、有效的方法,但如何提高供肝利用率和受者生存率一直也是医疗界所面临的问题。因此,迫切需要发现用于PLC早期诊断以及治疗作用评估的新生物标记物。近年来,随着分子生物学基因芯片技术的发展,越来越多的研究者利用该技术探索了各类生物小分子与疾病的关系,而环状RNA(circularRNA,circRNA)是目前研究重大疾病分子机理的热点。circRNA是一类保守性好、特异性高,对靶基因能发挥调控作用的内源性非编码RNA,利用circRNA微阵列芯片技术,对circRNA进行表达谱的构建,筛选出具有差异表达的circRNA作为疾病相关的生物标志物,并对其进行功能研究,可以使我们更好地了解疾病发生的分子机制,进而提高相关疾病的预防和诊断水平。目的:利用circRNA微阵列芯片分析围手术期PLC肝移植患者和健康对照者外周血circRNA表达谱,通过比较未实施肝移植术前患者与实施肝移植术后患者、健康对照者之间差异性表达的circRNA,筛查PLC特异表达的circRNA以及移植术后早期肝功能恢复相关的circRNA,为PLC早期诊断、预后以及治疗提供新的信息。方法:收集2014年12月1日至2015年8月31日于中国人民解放军第一八一医院确诊为PLC并进行肝移植手术,且治疗效果较好的4例患者的临床资料及外周血标本,其中患者外周血标本分为术前组(采集于PLC患者肝移植术前1天)、术后组(采集于患者肝移植术后1天、术后3天、术后7天)。健康对照组4例外周血标本采集于与PLC患者年龄、性别和民族等匹配的健康人群。利用Trizol法提取总RNA,使用NanoDrop ND-1000检测RNA是否降解并测定RNA浓度;采用circRNA微阵列芯片分析PLC患者肝移植围手术期和健康对照者circRNA表达谱。对肝移植术前组、术后组以及健康对照组表达的circRNA进行组间差异比较,筛选出与PLC特异表达以及移植术后早期肝功能恢复相关的circRNA。最后,应用RT-PCR验证circRNA微阵列芯片分析的准确性,并利用miRNA靶向结合位点预测软件预测与miRNA吸附相关的circRNA,分析circRNA的功能。结果:(1)在肝移植术前与术后自身对照比较研究中,PLC患者肝移植术后组(术后1天、3天、7天)circRNA归一化均值/PLC患者肝移植术前组circRNA归一化数值≥2.0(fold change≥2.0)的 circRNA 有 120 个,说明这 120 个 circRNA 在肝移植术后组中上调表达。PLC患者肝移植术后组(术后1天、3天、7天)circRNA归一化均值/PLC患者肝移植术前组circRNA归一化数值≤-2.0(fold change≤-2.0)的circRNA有182个,说明这182个circRNA在肝移植术后组中下调表达。(2)在PLC肝移植术前、术后分别与健康对照组比较研究中,术前组circRNA归一化数值/健康对照组circRNA归一化数值≥2.0 ∩术后组circRNA归一化均值/术前组circRNA归一化数值≤-2.0的circRNA有165个;术前组circRNA归一化数值/健康对照组circRNA归一化数值≤-2.0n术后组circRNA归一化均值/术前组circRNA归一化数值≥2.0的circRNA有80个。(3)165个circRNA在机体存在肿瘤时表达上调,实施PLC肝切除及肝移植术后表达下调,可能是与PLC相关生物标记物,miRNA靶向结合位点预测软件分析发现其中的hsa_circRNA_102347与miR-203存在相互作用位点,且已有文献报道miR-203为肝癌特异性表达miRNA。而80个circRNA在机体存在肿瘤时表达下调,实施PLC肝切除及肝移植术后表达上调,推测其可能与肝移植术后早期肝功能恢复有关,miRNA靶向结合位点预测软件分析发现其中的hsa_circRNA_400031与miR-483-5p存在相互作用位点,且已有文献报道miR-483-5p与肝癌发生发展存在密切的关系。(4)RT-PCR 验证表明 hsa_circRNA_400031、hsa__circRNA_102032、hsa__circRNA_1 03096和hsa_circRNA_102347的表达情况与芯片分析结果基本一致。此外,RT-PCR 检测发现 hsa_circRNA_1 02032、hsa__circRNA__103096 和hsa__circRNA_102347在肝移植术前组的表达量相对于健康对照组极其显著上调(p0.01),并且在肝移植术后1天、3天、7天有着显著下调的趋势,可能是机体PLC切除及肝移植预后相关的生物标记物。结论:(1)PLC患者实施肝摘除和肝移植前后存在大量差异表达circRNA,它们与miRNA相互作用,可能与PLC的病理过程以及移植治疗作用密切相关。(2)hsa_circRNA_400031、hsa_circRNA_102032、hsa_circRNA_103096 和hsa_circRNA_102347可能是PLC早期诊断以及肝移植术后预后相关标志物。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：广西师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

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本文编号：2331679