高转移肺癌细胞株的建立及其肿瘤干细胞生物学特性

发布时间：2018-11-14 18:53

【摘要】：目的研究高转移肺腺癌细胞株的肿瘤干细胞生物学特征。方法肺腺癌细胞系A549接种裸鼠皮下成瘤后,取肺的转移灶,通过机械分离法获取肺转移细胞,体外扩大培养后,再次接种裸鼠。如此反复接种裸鼠,获得稳定肺转移的细胞株A549-V13。采用无血清悬浮培养及PKH26染色确定A549-V13存在肿瘤干细胞。流式细胞术(FACS)检测和分选A549和A549-V13中肿瘤干细胞标志物CD133的表达并进行体内外生物学特征实验。结果建立稳定高转移A549-V13细胞株。无血清悬浮培养A549-V13,7天后形成的球形细胞团中存在单个PKH26阳性细胞。FACS检测显示,与A549中CD133~+细胞相比,高转移A549-V13细胞株中CD133~+细胞的表达比例显著提高4.85倍。A549-V13中CD133~+细胞具有更强的自我更新能力,侵袭能力提高1.42倍,耐药能力也显著增强,其IC50提高1.26倍,A549-V13的CD133~+细胞在裸鼠皮下接种2×10~2个细胞3月致瘤4/6,而接种2×10~2个A549的CD133~+细胞3月才致瘤2/6。结论建立高转移肺癌细胞株A549-V13,伴随CD133~+细胞表达比例的增加,其体内外生物学功能显著增强。
[Abstract]:Objective to study the biological characteristics of tumor stem cells in high metastatic lung adenocarcinoma cell lines. Methods Lung adenocarcinoma cell line A549 was inoculated into nude mice to form subcutaneous tumor. Lung metastatic cells were obtained by mechanical separation. After expanded culture in vitro, nude mice were inoculated again. After repeated inoculation in nude mice, a stable lung metastasis cell line A549-V13 was obtained. Serum free suspension culture and PKH26 staining were used to determine the existence of tumor stem cells in A549-V13. The expression of tumor stem cell marker (CD133) in A549 and A549-V13 was detected by flow cytometry (FACS) and the biological characteristics of A549 and A549-V13 were studied in vitro and in vivo. Results stable and highly metastatic A549-V13 cell lines were established. A single PKH26 positive cell was found in the globular cell mass formed after 7 days of serum-free suspension culture of A549-V13C. FACS analysis showed that compared with A549, CD133~ cells were found to be positive. The expression rate of CD133~ cells in high metastatic A549-V13 cell lines was significantly increased by 4.85 times. CD133~ cells in A549-V13 had a stronger self-renewal ability, a 1.42 fold increase in invasion ability, and a significant increase in drug resistance, and a 1.26 fold increase in IC50. A549-V13 CD133~ cells were inoculated subcutaneously for 2 脳 10 ~ 2 cells in nude mice for 3 months to induce tumor 4 / 6, while CD133~ cells inoculated with 2 脳 10 ~ 2 A549 cells for 3 months resulted in 2 / 6 tumors. Conclusion the establishment of high metastatic lung cancer cell line A549-V13 was accompanied by an increase in the expression of CD133~ cells, and its biological function in vivo and in vitro was significantly enhanced.
【作者单位】： 北京国家癌症中心/中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院细胞及分子生物学研究室;
【基金】：国家自然科学基金面上项目(31371445) 国家高技术研究发展计划(863计划)青年科学家专题(2014AA020537)
【分类号】：R734.2

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本文编号：2332010