两种肺腺癌细胞体外放射后残留细胞增殖迁移及干细胞变化的比较性研究

发布时间：2018-11-15 08:27

【摘要】：目的:研究普通肺腺癌细胞A549和具有云南宣威女性肺腺癌特征的细胞系XWLC-05体外不同剂量照射后不同时间生物学行为的变化,并比较A549细胞和XWLC-05细胞不同剂量放射后不同时间生物学行为的变化差异。方法:A549细胞和XWLC-05细胞,接受不同剂量6MvX线照射,各照射组接受剂量分别是4Gy,8 Gy,对照组(OGy)除未接受照射外其他处理均与照射组一致。采用克隆形成实验检测放射后细胞存活情况、CCK8增殖实验检测放射后残存细胞增殖能力、Transwell迁移实验检测放射后残存细胞的迁移能力、流式分析放射后残存细胞周期分布情况,及凋亡的变化、肿瘤干细胞表面标记蛋白CD133,CD44表达情况。Western Blot检测放射后残存细胞PCNA、MMP2, P53的表达水平。研究放射后普通肺腺癌细胞A549和宣威肺腺癌细胞XWLC-05生物学行为的变化及差异。结果:①通过平板克隆形成实验检测放射后细胞存活情况,结果发现,随着放射剂量的增加A549细胞和XWLC-05细胞存活分数逐渐降低,且XWLC-05细胞固有放射敏感性较A549细胞高。②CCK8增殖实验发现,X线放射后,残存A549细胞和XWLC-05细胞增殖能力都呈现先减弱后增强的趋势,但残存XWLC-05细胞增殖能力较A549细胞强,尤其在放射后2周表现尤为明显。残存A549细胞,XWLC-05细胞不同剂量照射组间增殖能力均相近,并无明显差异。③Transwell迁移实验检测放射后残存细胞的迁移能力,结果发现,残存的A549细胞和XWLC-05细胞迁移能力的变化具有时间依赖性,表现为先抑制后增强。未照射的A549细胞迁移能力较XWLC-05细胞强。在放射后96h内残存A549细胞迁移能力较残存XWLC-05细胞强,但在放射336h后,残存XWLC-05细胞迁移能力较残存A549细胞强。A549细胞和XWLC-05细胞8 Gy照射组间迁移能力较4Gy照射组弱。④流式分析放射后不同时间(12-192h)残存细胞周期分布的变化:(1)残存A549细胞出现G0/G1期阻滞而残存XWLC-05细胞G0/G1期比例低于对照组。A549和XWLC-05细胞4Gy照射组G0/G1期比例均较8Gy照射组高;(2)残存A549细胞和XWLC-05细胞G2/M期比例随着放射时间的增加都呈现出逐渐降低的趋势,但二者的比例均高于未照射组。两株细胞4Gy照射组G2/M期比例均较8Gy照射组低;(3) A549细胞和XWLC-05细胞放射后S期都发生先降低后升高的趋势。A549细胞照射组S期比例较对照组低,但XWLC-05细胞照射组S期比例在放射后24-48h出现暂时性的降低,随后开始上升并超过对照组。⑤流式分析放射后不同时间(12-192h)残存细胞凋亡的变化。A549细胞和XWLC-05细胞放射后,细胞凋亡率都较对照组增加,A549细胞在放射后192h凋亡率达最大,XWLC-05细胞的最高凋亡率发生在放射后48h。两株细胞的8Gy照射组凋亡率均比4Gy照射组高。⑥流式分析放射后不同时间(12-192h)残存细胞肿瘤干细胞的变化。X线放射后,肿瘤干细胞表面CD133和CD44的表达也发生变化:A549细胞放射后肿瘤干细胞表面CD133和CD44的表达变化不明显。但XWLC-05细胞照射后肿瘤干细胞表面CD44的表达增加明显,尤其是放射后192h,XWLC-05细胞照射组CD44的表达比例是对照组的3倍。⑦X线放射后12-336h,MMP-2,PCNA的表达水平与细胞迁移,增殖能力的变化并不完全一致,而P53的表达水与细胞凋亡的变化整体水平相一致。结论:放射后残存A549和XWLC-05细胞的增殖迁移变化与放射后的时间相关。A549细胞放射后增殖能力受抑制,但有增强的潜力。放射后残存XWLC-05的增殖能力表现为先减弱后增强,其增殖能力较A549强。残存A549和XWLC-05细胞放射后较长时间迁移能力均增强,且XWLC-05照射组迁移能力较A549照射组更强。不同剂量间的比较则表现为8Gy照射组的迁移能力较4Gy照射组弱。照射后A549细胞CD133, CD44表达变化不明显,而残存XWLC-05细胞CD133, CD44表达明显增加。MMP-2,PCNA可能不是参与放射后细胞增殖迁移的主要因素,而P53的表达与放射后细胞的凋亡密切相关。
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【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

【参考文献】