【摘要】：第一部分aPKC-τ和E-Cadherin在胆管癌组织中的表达及与预后的相关性研究目的：检测aPKC-τ和E-Cadherin在胆管癌组织中的表达,并探讨两者的表达与胆管癌患者临床预后的关系。方法：选取自2008年1月到2013年6月期间华中科技大学同济医学院附属同济医院胆胰外科64例经手术切除及经病理证实的胆管癌组织及10例胆总管囊肿病人胆管组织标本为研究对象。采用免疫组化(IHC)、实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)方法检测上述组织标本中aPKC-τ、E-Cadherin基因和蛋白的差异表达情况。采用卡方检验和t检验检测aPKC-τ和E-Cadherin的表达与临床病理分化和TNM分期的关系,采用Cox多因素回归分析胆管癌患者预后独立影响因素。结果：aPKC-τ在51.56%的胆管癌组织中呈高表达(33/64),在76.56%的癌旁组织中呈低表达(49/64),而正常组织中低表达则占100%(10/10)。aPKC-τ在胆管癌组织中的表达明显高于癌旁组织(x2=10.8,P=0.001)、正常组织(x2=9.306,P=0.002)。E-cadherin在67.2%的胆管癌组织中呈低表达(43/64),在32.8%的癌旁组织(21/64)和90%的正常组织(9/10)中呈高表达。E-cadherin在胆管癌组织中的表达明显低于癌旁组织(x2=16.949,P0.001)、正常组织(x2=10.614,P0.001)。aPKC-τ的表达水平与胆管癌分化程度呈负相关(x2=9.002,P==0.003),与胆管癌TNM分期密切相关,呈正相关(x2=7.000,P=0.008)。E-cadherin的表达水平与胆管癌分化程度呈正相关(x2=6.585,P0.001),与胆管癌TNM分期呈负相关(x2=5.505,P0.001)。Cox多因素回归分析显示,肿瘤分化程度、TNM分期、aPKC-i及E-cadherin表达水平是影响胆管癌患者预后的独立因素。结论：aPKC-i和E-Cadherin的表达水平与胆管癌的分化程度、TNM分期及预后密切相关,并且是胆管癌患者的独立预后因素。第二部分aPKC-τ通过Snail调节胆管癌细胞EMT目的：研究aPKC-τ调控胆管癌细胞EMT过程中的分子机制。方法：体外传代培养胆管癌细胞系TFK-1至对数期。合成携带aPKC-τ低表达(aPKC-i-siRNA)、aPKC-τ过表达(aPKC-τ-saRNA)的慢病毒包装质粒,并构建稳定aPKC-τ低表达TFK-1细胞(aPKC-τ-siRNA-TFK-1)、aPKC-、τ过表达TFK-1细胞(aPKC-τ-saRNA-TFK-1)、实验设置空白对照组(Blank)及阴性对照组(Control),并采用qRT-PCR、Western Blot检测不同实验组aPKC-τ、E-cadherin、Vimentin、Snai1、Snai2表达情况。为进一步检测aPKC-τ调节EMT过程中的关键作用靶点,选取aPKC-τ过表达组TFK-1(aPKC-τ-saRNA-TFK-1)细胞,运用Si-RNA技术靶向下调Snail表达,设置空白对照组(Blank),采用qRT-PCR、Western Blot检测不同实验组aPKC-τ、E-cadherin、Vimentin、Snail表达情况。结果：和Blank、Control组比较,伴随着aPKC-τ的表达下调,aPKC-τ-siRNA-TFK-1细胞中的E-cadherin表达量明显增高,Vimentin表达量则显著降低,Snail的表达量出现下降；而aPKC-τ过表达的aPKC-τ-saRNA-TFK-1细胞中上述标志物的表达情况则正好相反。各个实验组中Snai2的表达量则无明显变化。aPKC-i-saRNA-TFK-1细胞转染Si-Snail后,和对照组相比,实验组aPKC-τ表达无差异,伴随着Snail的表达量下降,其E-cadherin表达量出现升高,Vimentin表达量则出现下降。结论：aPKC-i是调节胆管癌EMT过程中的关键分子,并且该调节作用是依赖于转录因子Snail的介导作用来完成的。第三部分aPKC-τ调节胆管癌细胞化疗抵抗作用中的机制研究目的：研究aPKC-τ调控胆管癌细胞化疗抵抗作用中的机制。方法：体外传代培养胆管癌细胞系TFK-1至对数期。选取Blank、 aPKC-τ-siRNA-TFK-1、aPKC-i-saRNA-TFK-1细胞为实验对象,分别使用不同浓度吉西他滨(0.1μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)、顺铂(1μg/ml)、 10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml)作用于上述细胞,采用CCK-8方法检测不同实验组细胞在药物作用12h、24h、48h、72h的细胞生存率,并计算不同实验组细胞的IC50值。采用流式细胞学方法检测不同实验组细胞在不同药物最佳浓度作用后细胞的凋亡情况。最后采用Western blot检测上述实验中药物抵抗蛋白P-gp、凋亡蛋白Caspase3的表达情况。结果：CCK-8检测结果显示,吉西他滨、顺铂对细胞的增殖抑制作用具有浓度及时间依赖性,随着药物作用浓度的增加和作用时间的延长,三种细胞的生存率均出现不同程度的下降。其中,aPKC-τ-siRNA-TFK-1细胞的下降程度最为明显。Blank、aPKC-τ-siRNA-TFK-1、aPKC-τ-saRNA-TFK-1细胞对吉西他滨的IC50值分别为1.52μg/ml、0.56μg/ml、2.78μg/ml(p0.001),对顺铂的IC50值则分别为9.3μg/ml、5.7μg/ml、16.3μg/ml(P0.001)。流式细胞学检测结果表明,药物对aPKC-τ-siRNA-TFK-1细胞的诱导凋亡作用最为明显,而aPKC-τ-saRNA-TFK-1细胞则未见明显凋亡。Western blot结果显示,aPKC-τ-siRNA-TFK-1细胞中药物抵抗蛋白P-gp的表达量较对照组明显下降,药物作用后凋亡蛋白Caspase3的表达较对照组明显升高；而aPKC-τ-saRNA-TFK-1细胞中的结果则相反。结论：aPKC-τ能够降低胆管癌细胞对化疗药物的敏感性,其作用机制可能是通过上调P-gp的表达来产生药物抵抗。同时,aPKC-i能通过下调凋亡蛋白Caspase3的表达,参与调节化疗药物诱导胆管癌细胞凋亡的过程。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.8
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 孟兴凯,杨成旺;胆管癌的诊断及治疗进展[J];内蒙古医学院学报;2002年02期
2 李蓉,蔡中起,张静;胆管癌诊治进展[J];临床肝胆病杂志;2002年04期
3 黎靖,冯春红,张旭,雷正明;胆管癌病理误诊一例[J];中华肝胆外科杂志;2003年09期
4 吴高松,罗先文,吴剑宏,邹声泉,裘法祖;先天性胆总管囊肿胆汁对胆管癌细胞系的作用[J];中华消化杂志;2004年01期
5 孔琦,黄强;胆管癌分子生物学研究进展[J];肝胆外科杂志;2004年05期
6 彭创;汤恢焕;;胆管癌的分子生物学进展[J];国际病理科学与临床杂志;2007年02期
7 李惠珍;Aqeel ahmed;傅华群;;胆管癌的早期诊断[J];江西医药;2008年12期
8 王健东;全志伟;;胆管癌基础研究现状[J];中国实用外科杂志;2008年04期
9 邹声泉;郑顺贞;;胆管癌分子生物学的研究现状及其意义[J];腹部外科;2008年02期
10 顾劲扬;仇毓东;周建新;丁义涛;;胆管癌发病机制及治疗进展[J];肝胆外科杂志;2010年05期
相关会议论文 前10条
1 周娉婷;房萌;高春芳;;胆管癌N糖标志物发现及其机制研究[A];第一次全国中西医结合检验医学学术会议暨中国中西医结合学会检验医学专业委员会成立大会论文汇编[C];2014年
2 张丰深;马宽生;何振平;董家鸿;;细胞凋亡相关基因与胆管癌临床病理的关系[A];2001'全国肿瘤外科学术会议论文汇编[C];2001年
3 张丰深;马宽生;何振平;董家鸿;;CCK、Gastrin对bcl-2基因家族的调节作用[A];2001'全国肿瘤外科学术会议论文汇编[C];2001年
4 余建华;崔云甫;;胆管癌发病机制研究进展[A];中国抗癌协会胆道肿瘤专业委员会成立大会暨第一届全国胆道肿瘤学术会议论文集[C];2009年
5 张丰深;马宽生;何振平;董家鸿;;CCK,Gastrin对凋亡基因的调节作用[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年
6 马宽生;张丰深;何振平;董家鸿;;CCK,Gastrin对胆管癌细胞凋亡的作用[A];第七届全国肿瘤生物治疗学术会议论文集[C];2001年
7 韩鹏;邱乒乒;戴燕燕;练惠辉;李文岗;陈清西;;河蚬活性物质对肝癌、胆管癌细胞生长的影响[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
8 李薇;曾祥元;李昆;;胆管癌QBC939细胞株对人脐静脉内皮细胞VEGF和b-FGF表达的影响[A];中国微循环学会2014年全国学术会议大会汇编[C];2014年
9 张昆松;梁力建;殷晓煜;;Wnt通路相关因子在胆管癌细胞系中的表达及其siRNA干扰实验[A];中国抗癌协会胆道肿瘤专业委员会成立大会暨第一届全国胆道肿瘤学术会议论文集[C];2009年
10 马宽生;张丰深;何振平;董家鸿;;CCK、Gastrin在beauvericin诱导胆管癌细胞凋亡中的作用[A];2001'全国肿瘤外科学术会议论文汇编[C];2001年
相关重要报纸文章 前2条
1 陈汉桥;大连医科大学附属一院胆管癌基因治疗研究获重要进展[N];中国医药报;2006年
2 陈汉桥;基因治胆管癌研究有进展[N];健康报;2006年
相关博士学位论文 前10条
1 杨辉;FBXW7抑制胆管癌上皮—间质转化、干细胞特性及转移的作用及机制研究[D];山东大学;2016年
2 戚大川;应用基因芯片筛选胆管癌相关差异表达基因及对其功能的研究[D];苏州大学;2015年
3 高云姝;PRR11在消化道肿瘤中的表达变化及其在胆管癌中的作用机制[D];青岛大学;2016年
4 赵鑫;B7-H4在胆管癌免疫逃逸中的作用和临床意义的初步研究[D];第三军医大学;2015年
5 李勇;CDC42过表达在胆管癌侵袭转移机制中的作用实验研究[D];第三军医大学;2015年
6 刘颜;aPKC-ι调控胆管癌细胞EMT及化疗抵抗作用中的机制研究[D];华中科技大学;2015年
7 杨彦;14-3-3ζ结合aPKC-ι经上皮—间质细胞转化促进胆管癌侵袭转移[D];华中科技大学;2015年
8 韩鹏;胆管癌药物的筛选及作用机理的研究[D];厦门大学;2009年
9 陈绍勤;胆管癌蛋白组学研究[D];华中科技大学;2009年
10 钱振宇;胆管癌与乙型和丙型肝炎病毒感染的相关性研究[D];复旦大学;2003年
相关硕士学位论文 前10条
1 董阳民;SENP1对胆管癌细胞增殖与徖移能力的影响以及SENP1在胆管癌标本中的表达情况[D];福建医科大学;2015年
2 朴鹤云;矢车菊素-3-葡萄糖苷对人胆管癌QBC939细胞的影响[D];延边大学;2015年
3 李志锋;骨桥蛋白与CD44v6在胆管癌中的表达及临床意义[D];河北医科大学;2015年
4 黄朝君;γ-氨基丁酸在胆管癌细胞中的作用机制及相关效应基因的探讨[D];安徽医科大学;2015年
5 薛立新;Hedgehog信号转导通路在胆管癌中作用机制初步研究[D];泸州医学院;2011年
6 赵殿堂;siRNA沉默Wip1基因对人胆管癌QBC939细胞的影响[D];山东大学;2015年
7 刘畅;醛酮还原酶家族1的C1亚型在胆管癌发生发展中作用及机制[D];第二军医大学;2015年
8 周娉婷;恶性胆胰肿瘤N糖组标志物和相关机制研究[D];第二军医大学;2015年
9 路健;烟碱型乙酰胆碱α7受体对胆管癌神经浸润的影响[D];青岛大学;2015年
10 谭永辉;ErbB4在胆管癌中的表达变化及作用研究[D];湖南师范大学;2015年
，
本文编号：
2337130
